Separazione basata sulla cromatografia ad esclusione dimensionale di vescicole extracellulari batteriche: una tecnica per separare la popolazione eterogenea di vescicole batteriche Gram-negative della membrana esterna in base alle loro dimensioni

In condizioni di coltura adeguate, i batteri gram-negativi rilasciano vescicole della membrana esterna che trasportano il carico, o OMV, nel surnatante. Queste vescicole sono strutture sferiche di dimensioni eterogenee, piccole, che mediano la comunicazione cellulare.

Per frazionare sottopopolazioni di OMV di dimensioni diverse, prendere una colonna cromatografica vuota ad esclusione dimensionale con un filtro appropriato alla base per supportare la matrice.

Imballare la colonna con una matrice di filtrazione su gel costituita da perle sferiche chimicamente inerti di dimensioni dei pori definite, assicurando che la dimensione sia ottimale per escludere l'ingresso di OMV di grandi dimensioni. Equilibrare la colonna con un tampone appropriato per evitare che le perle si secchino per una purificazione ottimale.

Caricare il surnatante della coltura batterica contenente sottopopolazioni di OMV, aggregati proteici e acidi nucleici di diverse dimensioni sulla parte superiore della colonna. Lasciare che i campioni passino con la forza di gravità.

Mentre i campioni passano attraverso la colonna, gli OMV più grandi che non possono entrare nei pori, si muovono attraverso gli spazi interpartic