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Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:05 min. • July 8th, 2025
Le proteine batteriche integrali di membrana, ancorate alle membrane a doppio strato lipidico, facilitano il trasporto delle molecole attraverso le membrane e la trasduzione dei segnali. Per gli studi strutturali, specifiche proteine ricombinanti integrali di membrana sono sovraespresse con la proteina fluorescente verde fusa, GFP.
Per valutare la stabilità delle proteine di membrana ricombinanti dopo solubilizzazione con detergente, ottenere una frazione di membrana batterica contenente proteine di membrana integrali marcate con GFP. Aggiungere un detergente non ionico. Oltre la concentrazione critica, il detergente forma micelle.
Le micelle interagiscono con le membrane lipidiche e le proteine di membrana, solubilizzando le membrane e formando complessi proteina-detergente. Inoltre, le regioni transmembrana idrofobiche delle proteine di membrana possono rimanere non mascherate, causando l'aggregazione proteica. Inoltre, le GFP libere possono derivare dalla degradazione delle proteine di membrana.
Centrifugare il composto. Raccogliere il surnatante contenente la frazione solubilizzata nel detersivo.
Assemblare una colonna per cromatografia ad esclusione dimensionale collegata a un
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