Cromatografia di affinità basata su DFE: una tecnica per la purificazione di anticorpi monoclonali 2F5 da un campione grezzo utilizzando condizioni di eluizione basate su elevata forza ionica

Il DFE o DsRed-2F5-epitopo è una proteina di fusione ricombinante che comprende DsRed, una proteina fluorescente, e l'epitopo 2F5, un segmento dell'antigene glicoproteico dell'involucro HIV-1. Questo epitopo ha un'elevata affinità per il suo paratopo, una regione nella regione che determina la complementarità sull'anticorpo monoclonale 2F5.

Per purificare gli anticorpi monoclonali 2F5 da un campione grezzo, prelevare una colonna impacchettata con perle di resina porosa contenenti ligandi di affinità DFE immobilizzati sulla loro superficie. Sciacquare la colonna con un tampone di equilibratura adatto per mantenere il pH ed evitare interazioni non specifiche tra i componenti del campione e la resina nelle fasi successive.

Caricare il campione contenente gli anticorpi monoclonali 2F5 target nella colonna. Gradualmente, gli anticorpi nel campione iniziano a fluire attraverso la colonna o la fase stazionaria.

Durante il flusso, gli anticorpi interagiscono in modo reversibile con i ligandi di affinità DFE immobilizzati sulla fase stazionaria. In queste interazioni, il paratopo dell'anticorpo 2F5 si lega specificamente al suo epitopo complementare sul ligando DFE.

Lavare la colonna con un