Cromatografia su strato sottile ad alte prestazioni: una tecnica per la separazione e la quantificazione preliminare dei lipidi dai neutrofili
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 3:59 min. • July 8th, 2025
La cromatografia su strato sottile ad alte prestazioni, HPTLC, è una tecnica analitica avanzata per la separazione di diversi analiti utilizzando particelle adsorbenti di dimensioni fini come fase stazionaria. Questa caratteristica facilita un imballaggio efficiente, garantendo una migliore separazione.
Per separare i lipidi utilizzando HPTLC, prendere una miscela di lipidi con polarità diverse ottenuta dai neutrofili. Ora, pre-equilibrare la piastra in un solvente organico per rimuovere eventuali tracce di vapore acqueo e sporco, quindi attivarla ad alta temperatura per evitare il deterioramento della lastra.
Applicare la miscela lipidica e uno standard come punti separati vicino alla base della piastra. Trasferire la piastra in una camera di vetro satura di un solvente polare: la fase mobile. Lasciare che il solvente si muova verso l'alto attraverso l'azione capillare.
Durante lo spostamento, i lipidi più polari migrano lungo il fronte del solvente a causa della loro affinità verso il solvente polare. Al contrario, meno lipidi polari vengono adsorbiti sulle particelle di silice e ritardano. Far scorrere i lipidi in un solvente a polarità intermedia, seguito da un solvente complet
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