Elettroforesi su gel di poliacrilammide: una tecnica analitica per rilevare solfati di eparan di varie lunghezze di catena isolati dal tessuto polmonare di topo

I glicosaminoglicani solfatati come gli eparan solfati, HS, sono polisaccaridi solfatati lineari caricati negativamente di lunghezza variabile a catena, attaccati alle proteine della superficie cellulare.

Per stimare le HS di diversa lunghezza isolate dal tessuto polmonare di topo, iniziare con l'assemblaggio della cassetta di gel. Riempirlo parzialmente con una soluzione di acrilammide-bisacrilammide altamente concentrata, compresi gli agenti catalizzanti: persolfato di ammonio e tetra-metil-etilene-diammina. Ricoprire con acqua per evitare il contatto con l'aria, che può inibire la polimerizzazione. Incubare.

Gli agenti catalizzanti inducono la polimerizzazione dell'acrilammide-bisacrilammide, formando gel risolutivo a pori piccoli. Scartare l'acqua. Aggiungere una soluzione a bassa concentrazione di acrilammide-bisacrilammide con agenti catalizzanti. Inserire un pettine in gel per creare dei pozzetti. La soluzione polimerizza, formando un gel di impilamento a pori larghi.

Caricare le camere del serbatoio di elettroforesi con un tampone di funzionamento per una conduttività elettrica ottimale durante l'elettroforesi.

Sciogliere la miscela HS nel tampone di caricamento contenente