Multimer-PAGE per la separazione di complessi proteici nativi: una tecnica di separazione ibrida costituita da Blue Native-PAGE e SDS-PAGE per separare le proteine multimeriche intatte dal lisato tissutale

I complessi proteici multimerici sono essenziali per vari processi biologici.

Per separare i complessi proteici nel loro stato nativo mediante multimer-PAGE, prendere il lisato tissutale contenente i complessi desiderati. Caricare il lisato su un gruppo di gel per Blue native PAGE.

Riempire il sistema con un tampone alcalino contenente colorante anionico blu e collegarlo all'alimentazione. A pH alcalino, le molecole di colorante si legano al complesso proteico conferendogli una carica negativa complessiva senza denaturazione. Questo complesso proteico intatto e caricato negativamente migra attraverso il gel come una banda blu.

Dopo una corsa minima e consentendo alla proteina intatta di migrare nel gel risolutivo, asportare la striscia contenente il complesso. Incubare la striscia in una soluzione contenente un agente reticolante per consentire ai suoi gruppi reattivi di interagire con i gruppi amminici della proteina prossimale, stabilizzando il complesso multimerico.

Sostituire la soluzione reticolante con un reagente di tempra per attenuare l'attività dei reticolanti non reagiti. Aggiungi SDS - un detergente anionico - che conferisce una carica negativa uniforme al complesso pro