Elettroforesi su gel di agarosio di ampliconi di DNA post PCR: un metodo per analizzare i prodotti della PCR multiplex e valutare il successo della reazione PCR

Per analizzare gli ampliconi di DNA - frammenti di DNA amplificati di lunghezza specifica - risultanti dalla reazione a catena della polimerasi multiplex, PCR, utilizzando l'elettroforesi su gel di agarosio, assemblare un vassoio di colata con un pettine per creare pozzetti per il caricamento del campione.

Versare un'appropriata concentrazione di agarosio fuso, un polisaccaride lineare, disciolto in tampone per elettroforesi, integrato con un colorante fluorescente al DNA, sul vassoio di colata e lasciare solidificare.

L'agarosio fuso polimerizza, formando un gel tridimensionale con pori microscopici.

Posizionare il gel colato in una vasca per elettroforesi, con il lato del pettine orientato vicino al catodo negativo. Il serbatoio contiene il tampone per elettroforesi utilizzato nella preparazione del gel per mantenere una conduttività ottimale. Rimuovere il pettine.

Trasferire il campione di prodotto PCR, miscelato con una soluzione di colorante di carico per monitorare la migrazione del campione, nei pozzetti. Caricare un pozzetto con scale di DNA di lunghezza definita. Iniziare l'elettroforesi.

Gli ampliconi del DNA, con gruppi fosfato negativi equidistanti, migrano dai pozzetti