Elettroforesi capillare: una tecnica per analizzare gli ampliconi di reazione a catena della polimerasi marcati in fluorescenza

Per determinare le dimensioni dei frammenti di DNA utilizzando l'elettroforesi capillare, iniziare prelevando una piastra di saggio a più pozzetti. Ogni pozzetto contiene ampliconi PCR marcati in fluorescenza e di dimensioni diverse, oligonucleotidi di DNA a doppio filamento ottenuti dopo un ciclo di PCR.

Aggiungi alcuni frammenti di DNA a doppio filamento di dimensioni diverse al pozzetto, che fungono da standard di dimensione. Ognuna di queste molecole di DNA è dotata di un'etichetta fluorescente per una facile identificazione.

Integrare il pozzo con formammide, un forte denaturante, e scaldare ad alta temperatura. Questo passaggio denatura il DNA, formando frammenti a filamento singolo che possono migrare facilmente attraverso i pori del gel.

Posizionare la piastra in un'unità analizzatore di frammenti che contiene gel polimerico pre-iniettato all'interno del suo sistema capillare.

Applicare un'alta tensione per introdurre elettrocineticamente il DNA dal pozzetto nel capillare di diametro sottile al catodo, il terminale negativo. Le molecole di DNA caricate negativamente migrano verso l'anodo caricato positivamente. I filamenti di DNA più corti affrontano meno forza di attrito e