JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 5:06 min. • July 8th, 2025
Gli agenti chemioterapici inducono rotture del DNA a singolo e doppio filamento nelle cellule tumorali, causando danni al DNA e morte cellulare.
Per quantificare il danno al DNA, mescolare le cellule tumorali trattate con chemioterapia con agarosio fuso a basso punto di fusione. Pipettare questa miscela su vetrini di vetro prerivestiti di agarosio. Lasciare solidificare l'agarosio fuso, incorporando le cellule all'interno della matrice di gel porosa.
Trattare con un tampone di lisi contenente alte concentrazioni di detergenti e sali. I detergenti solubilizzano le membrane cellulari e nucleari. Inoltre, l'alto sale rimuove le proteine istoniche dal DNA, lasciando il DNA superavvolto attaccato alla matrice nucleare.
Incubare in tampone per elettroforesi alcalina. L'ambiente alcalino provoca lo svolgimento dei superavvolgimenti del DNA, esponendo rotture di DNA a singolo filamento e doppio filamento.
Posizionare i vetrini nel vassoio di gel contenente tampone per elettroforesi. Iniziare l'elettroforesi.
Essendo caricato negativamente, il DNA è attratto verso l'anodo positivo. I frammenti di DNA danneggiati migrano fuori dal nucleo e viaggiano attraverso la matrice di gel porosa, con i
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