SDS PAGE non riducente: un metodo per analizzare complessi proteici multimerici legati al disolfuro

Le proteine multimeriche sono stabilizzate da legami intermolecolari, covalenti e disolfuro tra i loro residui di cisteina, che è fondamentale per mantenere la loro integrità strutturale e funzionale.

Per analizzare tali complessi mediante PAGE non riducente, prendere la concentrazione desiderata di proteine stabilizzate con disolfuro. Aggiungere un tampone di campionamento non riducente e riscaldare il campione.

Questo tampone contiene SDS, che conferisce una carica negativa complessiva alle proteine, e un colorante di tracciamento per visualizzare il loro movimento nel gel. Il tampone è privo di qualsiasi agente riducente, il che consente ai legami disolfuro di rimanere intatti, facilitando l'integrità del complesso multimerico.

Caricare i singoli complessi in pozzetti del gel di poliacrilammide della percentuale desiderata, preassemblati in un apparato in gel. Aggiungi una scala proteica di dimensioni note in un altro pozzetto. Immergere i pozzetti in un buffer di corsa basato su SDS e collegare l'apparecchio a una fonte di alimentazione.

La corrente elettrica costringe i complessi proteici caricati negativamente a muoversi attraverso i pori del gel verso l'anodo, il terminale p