Elettroforesi capillare con affinità di spostamento di mobilità: un metodo per analizzare le interazioni campione-ligando in base alla migrazione differenziale dei complessi proteina-ligando

I ligandi, come gli ioni metallici, si legano in modo non covalente a una proteina specifica, formando un complesso di ioni proteina-metallo. Questo legame altera la carica complessiva della proteina, il che consente la caratterizzazione di questi complessi utilizzando l'elettroforesi capillare di affinità.

Per iniziare, prendi un sottile capillare di vetro pre-condizionato con gruppi silanolo carichi sulla superficie interna. Sciacquare il capillare con una soluzione di EDTA. L'EDTA è un agente chelante che rimuove le impurità degli ioni metallici. Ora, iniettare idrodinamicamente la soluzione campione contenente la proteina desiderata nel capillare dalla sua estremità positiva o anodo.

Applicare un'alta tensione per creare un flusso elettro-osmotico, costringendo le proteine nella loro conformazione nativa con cariche intrinseche a muoversi all'interno del capillare verso il catodo. Registrare il modello di migrazione delle proteine non legate dal capillare.

Successivamente, introdurre una soluzione di ligando specifica nel capillare insieme ai campioni di proteine e applicare la stessa tensione. All'interno del capillare, le molecole del ligando si legano in modo non covalente a