Name: Lapplicazione di permanente legatura dellarteria cerebrale media nel mouse (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-07-25T13:00:00.000+00:00
Duration: 8 min 27 s
Description: Impara la tecnica di legatura dell'arteria cerebrale media nel topo per studiare l'ischemia cerebrale focale. Questo metodo produce volumi di infarto riproducibili e migliora la sopravvivenza post-operatoria.

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La tecnica chirurgica è stata originariamente acquisite nel laboratorio del Dr. William D. Hill presso il Medical College of Georgia. Gli autori desiderano inoltre ringraziare il dottor David A. Rempe e Landa Prifti per l&#39;utilizzo della fotocamera dissezione. Questa ricerca è stata sostenuta da NIH NS041744, NS051279, F31 NS064700 e AHA 30815697D.

Questo protocollo è stato approvato dalla Università di Rochester comitato dedicato l'uso etico degli animali nella ricerca (UCAR). Tecniche asettiche da seguire durante il protocollo. L'utilizzo di guanti sterili e una maschera è necessario. Tutte le attrezzature, materiali, prodotti chimici, e gli strumenti che vengono utilizzati durante il protocollo sono descritte nella tabella 1. 1. La preparazione pre-chirurgica <ol><li> Iniettare topi per via sottocutanea con buprenorfina (0.05mg/kg) 2 h prima dell'intervento, subito dopo l'intervento chirurgico e poi ogni 3-5 ore durante le prime 24 ore post-operatorio. </li><li> Sterilizzare tutti gli strumenti chirurgici, spugne garza, e applicatori punta del cotone in autoclave. Mantenere gli strumenti chirurgici in etanolo al 70% durante l'intervento chirurgico e aria secca a destra garza sterile prima dell'uso. Spruzzare l'area di lavoro con il 70% di etanolo. </li><li> Anestetizzare il mouse con un 3% isofluorane-20% miscela di ossigeno del gas utilizzando un vaporizzatore anestetico. Regolare la quantità di ossigeno con il misuratore di portata. Testare il livello di anestesia da dito o pizzicare la coda (che dovrebbero essere non risponde). Mantenere il livello di anestesia con il 2% (v / v) isofluorane. </li><li> Applicare lacrime artificiali per gli occhi del mouse e usare cautela per evitare di danneggiare l'occhio durante la procedura chirurgica. Posizionare il mouse sul lato destro in posizione laterale. </li><li> Radere l'area sul lato sinistro tra l'occhio sinistro e la base dell'orecchio sinistro con il tagliaunghie animale. Pulire l'area alternando tra una soluzione betadine e il 70% di etanolo con applicatori punta di cotone e strofinare leggermente la zona. Ripetere se necessario. </li><li> Posizionare il mouse su di una piastra elettrica collegato ad una sonda rettale per mantenere la temperatura corporea a 37 ° C. Inserire la sonda rettale utilizzando olio minerale. </li><li> Posizionare il mouse sul lato destro sotto il microscopio e fissare con nastro adesivo. Tagliare una finestra in una garza e coprire un'area chirurgica. </li></ol> 2. Procedura chirurgica e MCA Ligation <ol><li> Fai una incisione verticale tra l'occhio sinistro e la base dell'orecchio sinistro utilizzando bene le forbici diritte. Usa hemostats curva per mantenere l'area chirurgica aperta. </li><li> Effettuare una incisione orizzontale sul muscolo temporale utilizzando le forbici a molla e un po 'separare il muscolo temporale dal cranio lentamente tirando con una pinza. </li><li> Fai una piccola craniotomia subtemporal all'incrocio tra zigomatica e ossa squammoso utilizzando un ago da 18G mentre si tiene la mandibola con una pinza curva. </li><li> Esporre il MCA rimuovendo il piccoli pezzi di cranio con Rongeurs osso. Dell'arcata zigomatica e contenuti orbitale non deve essere danneggiato durante questo processo. Se l'essiccamento eccessivo di tessuto si verifica durante questo processo, si applicano PBS sterile con applicatori punta di cotone. </li><li> Legare la porzione distale del MCA cauterizer utilizzando un piccolo vaso. </li><li> Posizionare il muscolo temporale nella sua posizione originale e chiudere il sito di incisione chirurgica con 5-0 punti di sutura in nylon. </li><li> Interrompere l'anestesia e rimuovere la sonda rettale. Iniettare il mouse con una dose 2 di buprenorfina (0.05mg/kg) per via sottocutanea. Ritorna il mouse per la gabbia che è stata mantenuta a 37 ° C con un pannello di riscaldamento. </li><li> Seguire da vicino il mouse per le prossime 24 ore per ogni disagio (riduzione dell'appetito / consumo di acqua, la postura ingobbita, aumento della respirazione, pilo-eretto capelli). Iniettare il mouse con buprenorfina per via sottocutanea ogni 3-5 ore dopo l'intervento fino a 24 ore. Fornire il mouse con gel di recupero durante questo periodo. </li></ol> 3. TTC colorazione e Determinazione della gittata sistolica <ol><li> Ventiquattro ore dopo l'intervento profondamente anestetizzare il mouse, transcardially profumato il mouse con un 4% TTC (w / v) in tampone fosfato (PBS) per 15 min e poi con una soluzione di paraformaldeide al 4% per 10 minuti utilizzando un mini pompa peristaltica a portata media. Togliere il cervello e posizionarlo nella soluzione di paraformaldeide al 4% durante la notte. </li><li> Posizionare il cervello nel blocco di sezionamento. Tagliate a fette il cervello 1 mm di spessore utilizzando lame di rasoio. </li><li> Mettere le fette accanto ad un righello scala millimetrata. Fotografare le fette utilizzando una fotocamera digitale collegata al microscopio da dissezione. </li><li> Calcolare l'area colpo sottraendo il non-infartuato area del sito ipsilaterale dalla superficie totale del sito controlaterale utilizzando immagini J Software (http://rsbweb.nih.gov/ij/). Calcolare la gittata sistolica sovrapponendo l'area colpo di fette di 22. </li></ol> 4. Indicazioni per l'uso J software Image <ol><li> Aprire il file immagine da analizzare in software Image J cliccando sul menu File. </li><li> Fare clic sulla scheda 'retta' nel programma. Tracciare una linea retta tra i due margini sul righello. Fare clic su 'analizzare' menu e seleziona 'scala set'. Impostare la distanza nota come 1, unità di lunghezza mm. </li><li> Fare clic sulla scheda 'cerchio a mano libera'. Disegnare un cerchio a delineare l'emisfero controlaterale. Fare clic sul menu 'analizzare' e selezionare 'misura'. La finestra di calcolo si aprirà mostra l'area del cerchio disegnato. </li><li> Disegnare un altro cerchio intorno alla emisfero esclusi ictus ipsilaterale (bianco) zona. Misurare l'area, come indicato al punto 4.3. Il nuovo valore verrà aggiunto alla finestra di calcolo. La differenza tra il 1 ° e 2 ° valori rappresenta l'area dell'infarto, che è indicato come nella formula sottostante. </li><li> Calcolare l'area corsa in ogni fetta ripetendo i passaggi 4,2-4,4. Prendere sommatoria dell'area corsa calcolato in ogni sezione (ΣA n). Questo rappresenta gittata sistolica conoscere il fatto che lo spessore di ogni fetta è 1 mm. ΣA n x 1 mm (spessore di ogni fetta) volume = Corsa </li></ol> 5. Rappresentante dei risultati: Il infarti ottenuto permanente legatura MCA nel topo sono in gran parte corticale. Tuttavia, è possibile ottenere le lesioni subcorticali se l'MCA è legatura prossimale al ramo lenticulostriate. I volumi di ictus dopo MCA legatura può variare da 10 millimetri a 35 mm ³ ³ 19, 23. I volumi corsa calcolata con colorazione TTC in Moyanova et al. 19 sono tra ³ ³ 10mm a 22 millimetri mentre i volumi di corsa determinata da immagini MRI a Filiano e altri 23 sono tra ³ ³ 20mm a 35mm. Il possibile motivo di queste differenze forse la posizione esatta della legatura ed i diversi metodi utilizzati per misurare i volumi di corsa. Nella Figura 1, un cervello colorato TTC 24 ore posto permanente legatura MCA in un tipo selvaggio C57/BL6 del mouse viene mostrato. Il sito di corsa è di colore bianco in apparenza (Fig. 1A, B). Figure 1A e B illustrano il sito dell'infarto da diverse angolazioni. La Figura 2 mostra fette 1 mm di spessore del cervello macchiato TTC corsa da anteriore a posteriore (Fig. 2A-G). Volume dell'infarto è stata calcolata 24 ore post-operatorie. Il volume dell'infarto è ³ ~ 23mm. <img src="/files/ftp_upload/3039/3039fig1.jpg" alt="Figura 1" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 1"> Figura 1. Rappresentazione del sito ictus. AB, TTC macchiato immagini del cervello intero, 24 ore dopo la legatura MCA. Area bianca rappresenta l'infarto. <img src="/files/ftp_upload/3039/3039fig2.jpg" alt="Figura 2" data-altupdatedat="1787634011000" data-alt="Figura 2"> Figura 2. Risultati rappresentativi. (A&gt; G), TTC macchiato 1 millimetro cervello sezioni, 24 ore dopo Mcal. Fette sono allineate da anteriore a posteriore. Area bianca rappresenta l'infarto.

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<li>Moyanova, S. G. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Protective+role+for+type+4+metabotropic+glutamate+receptors+against+ischemic+brain+damage%5BTitle%5D)+AND+%22J+Cereb+Blood+Flow+Metab%22%5BJournal%5D)">Protective role for type 4 metabotropic glutamate receptors against ischemic brain damage.</a> J Cereb Blood Flow Metab. , (2010).</li>
<li>Ortolano, F. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Advances+in+imaging+of+new+targets+for+pharmacological+intervention+in+stroke%3A+real-time+tracking+of+T-cells+in+the+ischaemic+brain%5BTitle%5D)+AND+%22Br+J+Pharmacol%22%5BJournal%5D)">Advances in imaging of new targets for pharmacological intervention in stroke: real-time tracking of T-cells in the ischaemic brain.</a> Br J Pharmacol. 159, 808-811 (2010).</li>
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</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Il metodo di legatura permanente MCA dà volumi infarto altamente riproducibili e un aumento post-operatorio tassi di sopravvivenza rispetto ad altri metodi disponibili. La facilità e la breve durata (~ 30 min) della procedura di renderlo ancora più pratico. Il metodo è ampiamente utilizzato sia in topi e ratti. Questa tecnica richiede un intervento chirurgico invasivo sotto uno stereomicroscopio. Pertanto, l&#39;esperienza nella gestione sotto un microscopio e perfezionare una craniotomia di...

<table border="1"><tbody><tr><th> NOME </th><th> SOCIETA &#39;E NUMERO CATALOGO </th></tr><tr><td> Soluzioni e prodotti chimici A. </td><td></td></tr><tr><td> Povidone-iodio soluzione, lavaggio chirurgico </td><td> Aplicare, 82-209 </td></tr><tr><td> 70% di etanolo </td><td> Koptec, V1001 </td></tr><tr><td> 2,3,5 trifeniltetrazolio cloruro (TTC) </td><td> Sigma, T8877 </td></tr><tr><td> 4% paraformaldeide </td><td> Scienze della microscopia elettronica, 159SP </td></tr><tr><td> Tampone fosfato isotonico, pH: 7,4 </td><td> Realizzato e sterilizzati in laboratorio. </td></tr><tr><td> Olio minerale </td><td> PML Microbiologicals, R6570 </td></tr><tr><td> Isofluorane </td><td> La Società Butler, 029405 </td></tr><tr><td> Buprenorfina (0.3mg/ml) </td><td> Hospira, NDC 0409-2012-32 </td></tr><tr><td> Lacrime artificiali </td><td> La Società Butler, 007312 </td></tr><tr><td> Recupero Gel </td><td> Chiaro H 2 O, 72-01-5022 </td></tr><tr><td> B. Materiali e attrezzature chirurgiche </td><td></td></tr><tr><td> C57/BL6 del mouse, 10-12 settimane di età </td><td> La colonia è stato allevato nel vivaio universitario </td></tr><tr><td> 100% bombola di ossigeno </td><td> Airgas </td></tr><tr><td> Anestetico vaporizzatore e misuratore di portata </td><td> Surgivet, Modello 100 </td></tr><tr><td> Pad di riscaldamento con sonda rettale </td><td> Strumenti Scienza bene, TR200 </td></tr><tr><td> Microscopio da dissezione </td><td> Zeiss, Stemi 2000 </td></tr><tr><td> Riscaldamento a pannelli </td><td> Petco Services Ltd. 0307-013 </td></tr><tr><td> Piccola nave Set Cauterizer </td><td> Strumenti Scienza bene, 18000-00 </td></tr><tr><td> Mini pompa peristaltica </td><td> Harvard Apparatus, MPII </td></tr><tr><td> Siringa da 1 ml </td><td> BD, 329650 </td></tr><tr><td> 18G ago </td><td> Becton Dickinson, 305196 </td></tr><tr><td> Chirurgico di sutura in nylon 5,0 </td><td> Ethilon, 698H </td></tr><tr><td> Blocco di sezionamento </td><td> Kent scientifico, 1mm </td></tr><tr><td> Singolo bordo Razor Blades </td><td> Scienze della microscopia elettronica, 71962 </td></tr><tr><td> Etichetta del nastro </td><td> Scienceware, Bel-arte Prodotti F13463-2075 </td></tr><tr><td> Garza Spugne </td><td> Kendall rezza 2252, Johnson e Johnson 6415 </td></tr><tr><td> Suggerimento cotone Applicatori </td><td> Puritana 806-WCL </td></tr><tr><td> C. Strumenti di Chirurgia </td><td></td></tr><tr><td> Forbici chirurgiche Primavera </td><td> Strumenti Scienza multa 15003-08 </td></tr><tr><td> Forcipe Microdissecting angolato </td><td> Strumenti Scienza Belle 5 / 45 </td></tr><tr><td> Pinze Microdissecting curve </td><td> Belle Scienza Strumenti 5 Ti </td></tr><tr><td> Belle forbici dritto </td><td> Strumenti Scienza multa 14568-12 </td></tr><tr><td> Osso curvo pinza ossivora </td><td> Strumenti Scienza multa 16021-14 </td></tr><tr><td> Emostatica Hartman curvo </td><td> Strumenti Scienza multa 13003-10 </td></tr></tbody></table> Tabella 1. L&#39;elenco dei materiali, strumenti e sostanze chimiche usate per la procedura di legatura MCA. Soluzioni e prodotti chimici A., B. Materiali e attrezzature chirurgiche, C. Chirurgia Strumenti.

l&#39;applicazione di permanente legatura dell&#39;arteria cerebrale media nel mouse

The Application Of Permanent Middle Cerebral Artery Ligation in the Mouse

Ischemia cerebrale focale è tra il tipo più comune di ictus osservato nei pazienti. A causa della rilevanza clinica c&#39;è stato un lungo lavoro per sviluppare modelli animali adatti a studiare gli eventi che si svolgono durante l&#39;insulto ischemico. Queste tecniche sono transitori o permanenti, i modelli di ischemia focale o globale usando molti diversi modelli animali, con i roditori più comuni sono. Il metodo di legatura permanente MCA, che viene anche definito come pMCAo in letteratura è ampiamente utilizzato come modello di ischemia focale nei roditori 1-6. Questo metodo è stato originariamente descritto per i ratti da Tamura et al. nel 1981 7. In questo protocollo una craniotomia è stato utilizzato per accedere alla MCA e le regioni prossimali sono state occluse da elettrocoagulazione. Il infarti coinvolgere soprattutto le regioni corticali e striatali volte a seconda della posizione della occlusione. Questa tecnica è ormai ben consolidata e utilizzata in molti laboratori 8-13. L&#39;uso precoce di questa tecnica ha portato alla definizione e descrizione del &quot;core infarto&quot; e &quot;penombra&quot; 14-16, ed è spesso utilizzata per valutare il potenziale neuroprotettivo composti 10, 12, 13, 17. Anche se gli studi iniziali sono stati condotti nel ratto, legatura permanente MCA è stato utilizzato con successo nei topi con lievi modifiche 18-20. Questo modello produce infarti riproducibile e un aumento post-tassi di sopravvivenza. Circa l&#39;80% degli ictus ischemico negli esseri umani avvengono in zona MCA 21 e quindi questo è un modello molto importante per gli studi di ictus. Attualmente, c&#39;è una scarsità di trattamenti efficaci a disposizione dei pazienti colpiti da ictus, e quindi c&#39;è bisogno di buoni modelli per testare potenziali composti farmacologici e valutare i risultati fisiologici. Questo metodo può essere utilizzato anche per studiare i meccanismi intracellulari di risposta all&#39;ipossia in vivo. Qui, vi presentiamo l&#39;intervento legatura MCA in un mouse C57/BL6. Descriviamo la preparazione pre-chirurgica, la chirurgia legatura MCA e 2,3,5 trifeniltetrazolio cloruro (TTC) colorazione per la quantificazione dei volumi di infarto.

Dell&#39;arteria cerebrale media (MCA) legatura è una tecnica per lo studio ischemia cerebrale focale in modelli animali. In questo metodo, l&#39;arteria cerebrale media è esposta da craniotomia e legato da cauterizzazione. Questo metodo dà volumi infarto altamente riproducibili e un aumento post-operatorio tassi di sopravvivenza rispetto ad altri metodi disponibili.

L&#39;applicazione di permanente legatura dell&#39;arteria cerebrale media nel mouse

L'ischemia cerebrale focale è tra i tipi più comuni di ictus riscontrati nei pazienti. A causa della sua rilevanza clinica, è stato compiuto un prolungato sforzo per...

L'obiettivo generale di questa procedura è studiare l'ischemia cerebrale focale in modelli animali. Questo viene ottenuto effettuando innanzitutto una piccola incisione cutanea tra l'occhio sinistro e la base dell'orecchio. Successivamente, si esegue una craniotomia al punto di giunzione tra l'arco zigomatico e l'osso squamoso per esporre l'arteria cerebrale media, che viene quindi legata utilizzando un cauterizzatore per piccoli vasi.Infine, la cute viene suturata per chiudere la ferita. Alla fine, si possono ottenere risultati che mostrano un'area di infarto localizzata nell'emisfero sinistro del cervello del topo. Il cervello può essere colorato con TTC o analizzato mediante risonanza magnetica (MRI) per la visualizzazione di un ictus.Il cervello colpito può essere utilizzato anche per la determinazione dell'espressione proteica o dell'mRNA. Ciao, sono Garza Chola. Sono uno studente laureato nel laboratorio di Gale Johnson presso l'Università di Rochester.Questo metodo può contribuire a rispondere a domande fondamentali nel campo dell'ictus, ad esempio illustrando i meccanismi che portano alla morte cellulare nel cervello ischemico. Per prepararsi all'intervento chirurgico, ster

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Occlusione filamentosa dell'arteria cerebrale media è un modello comune per lo studio di ictus ischemico nei topi.

Corsa di modellazione in Mouse - Medio occlusione dell&#39;arteria cerebrale con il Modello Filament

Dimostriamo nel video un metodo per produrre una occlusione dell'arteria cerebrale media in topi adulti utilizzando un monofilamento intraluminale. Mostriamo anche come valutare il grado di infarto cerebrale da 2,3,5-trifeniltetrazolio cloruro (TTC) colorazione.

Modello murino di Mezzo occlusione dell&#39;arteria cerebrale

Il modello intraluminale occlusione cerebrale nei topi viene qui presentato. Il grado di infarto cerebrale viene valutata da un punteggio neurologico e colorazione violetto cresolo, una colorazione alternativa alla TTC, che offre il grande vantaggio di testare in parallelo molti marcatori di interesse.

Modello murino di MCAO intraluminale: valutazione infarto cerebrale da colorazione viola cresile

Descriviamo un metodo altamente riproducibile per l'occlusione permanente di un roditore grande vaso sanguigno cerebrale. Questa tecnica può essere realizzato con pochissima danni periferici, minima perdita di sangue, un elevato tasso di sopravvivenza a lungo termine, e volume dell'infarto coerente commisurato alla popolazione clinica umana.

Cerebrale permanente occlusione di vasi<em&gt; Via</em&gt; Doppio Legatura e resezione

Vari modelli murini di occlusione dell'arteria cerebrale media (MCAO) sono ampiamente utilizzati nella ricerca sul cervello sperimentale. Qui, dimostriamo il modello di transcranica permanente distale MCAO che produce coerente infarto corticale di misura corrispondente al danno imposto dalla maggioranza degli ictus ischemici umani.

Corsa di modellazione in Mouse: Coagulazione permanente dell&#39;arteria cerebrale media distale

Cervello cellule mieloidi caratterizzazione seguente ictus può essere eseguita utilizzando il metodo stereologia frazionatore ottica, o da una analisi citofluorimetrica del cervello leucociti sospensioni. Entrambi sono tecniche utili per effettuare un'accurata distinzione fenotipica delle principali sottopopolazioni di cellule mieloidi trovati nel cervello ischemico.

Stereologica e Citometria a Flusso Caratterizzazione dei leucociti sottopopolazioni in modelli di transitori o permanenti Cerebral Ischemia

Per comprendere la fisiopatologia di ictus, è importante utilizzare modelli affidabili. Questo documento descrive uno dei modelli di ictus più frequentemente utilizzati nei topi, chiamato il modello cerebrale media occlusione dell'arteria (MCAO) (anche chiamato il filamento intraluminale o modello di sutura) con riperfusione.

Approccio chirurgico per occlusione dell&#39;arteria cerebrale media e riperfusione indotta ictus nei topi

l'occlusione chirurgica di un ramo distale dell'arteria cerebrale media (MCAO) è un modello di uso frequente nella ricerca ictus sperimentale. Questo manoscritto descrive la tecnica base di MCAO permanente, combinata con l'inserimento di una finestra cranica laterale, che offre la possibilità di longitudinale microscopia intravitale nei topi.

Laterale cronica cranica finestra Preparazione Attiva In Vivo Condizioni seguito distale Medio occlusione dell'arteria cerebrale nei topi

Questo protocollo dimostra un modello unico di ictus del topo con un infarto di medie dimensioni e un eccellente tasso di sopravvivenza. Questo modello consente ai ricercatori preclinici sull'ictus di estendere la durata dell'ischemia, utilizzare topi anziani e valutare gli esiti funzionali a lungo termine.

Un modello modificato di occlusione dell'arteria cerebrale media transcranica per studiare gli esiti dell'ictus nei topi anziani

Qui, presentiamo un protocollo per stabilire un modello di occlusione dell'arteria cerebrale media distale (dMCAO) attraverso l'elettrocoagulazione transcranica in topi C57BL/6J e valutare il successivo comportamento neurologico e le caratteristiche istopatologiche.

Induzione di ictus ischemico acuto nei topi utilizzando la tecnica di occlusione dell'arteria media distale

L'obiettivo di questo studio era stabilire un metodo riproducibile per eseguire una craniectomia seguita da un'occlusione permanente e selettiva dell'arteria cerebrale media nei ratti, da applicare in studi sperimentali sui deficit di memoria motoria e spaziale.

Occlusione selettiva e permanente dell'arteria cerebrale media nei ratti: un approccio sperimentale per studiare i deficit di memoria motoria e spaziale

Impara la tecnica di legatura dell'arteria cerebrale media nel topo per studiare l'ischemia cerebrale focale. Questo metodo produce volumi di infarto riproducibili e migliora la sopravvivenza post-operatoria.

L'applicazione di permanente legatura dell'arteria cerebrale media nel mouse

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