Elettroforesi su gel di poliacrilammide bidimensionale: una tecnica di separazione per l'analisi delle proteine in una miscela proteica complessa basata sulla carica e sul peso molecolare

Per l'elettroforesi su gel bidimensionale di una miscela proteica derivata da tessuto tumorale omogeneizzato, trattare con tampone contenente caotropi, detergente zwitterionico e agente riducente. I caotropi e i detergenti denaturano e solubilizzano le proteine. Gli agenti riducenti riducono i legami disolfuro delle proteine, generando gruppi tiolici liberi e dispiegando le proteine per una risoluzione ottimale delle proteine.

Trasferire la miscela proteica trattata in un gradiente di pH immobilizzato, IPG, portastrisce. Posizionare una striscia IPG comprendente un gradiente lineare di pH all'interno della matrice di gel di acrilammide. Aggiungere olio minerale per prevenire l'evaporazione della soluzione proteica. Trasferire il supporto in un sistema IEF a messa a fuoco isoelettrica. Lasciare che la soluzione proteica reidrati la striscia.

Eseguire l'IEF di prima dimensione. La corrente elettrica fa sì che le proteine cariche migrino attraverso il gradiente di pH verso elettrodi di carica opposta, immobilizzandosi nei rispettivi punti isoelettrici - pH al quale le proteine hanno carica netta zero.

Dopo l'IEF, trattare la striscia IPG con dodecil solfato di sodio, SDS, un detergent