Elettroforesi su gel per zimografia: una tecnica elettroforetica per rilevare le metalloproteinasi della matrice valutando l'attività enzimatica
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 6:59 min. • July 8th, 2025
La metalloproteinasi della matrice, o MMP, una proteasi multidominio che comprende domini propeptidici e catalitici, è secreta come enzima inattivo o zimogeno da cellule specifiche. L'interazione tra lo ione zinco del dominio catalitico e il residuo di cisteina del dominio propeptidico mantiene inattiva la MMP.
Per rilevare le MMP nel surnatante di coltura cellulare mediante elettroforesi su gel per zimografia, riempire il serbatoio per elettroforesi contenente cassetta di gel con dodecil solfato di sodio o tampone di corsa contenente SDS.
Caricare il surnatante di coltura miscelato con il tampone di caricamento, seguito dagli standard proteici, in pozzetti di gel di poliacrilammide, copolimerizzato con un substrato proteico specifico per MMP.
La SDS, un detergente caricato negativamente, in condizioni non riducenti, interrompe le interazioni cisteina-zinco nelle MMP e denatura le proteine mentre conferisce una carica negativa.
Eseguire l'elettroforesi. Il campo elettrico fa sì che le proteine caricate negativamente migrino verso l'anodo caricato positivamente, causando la separazione delle proteine in base alle dimensioni.
Dopo l'elettroforesi, trattare il gel con un tampone rinat
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici