Saggio del doppio strato lipidico supportato sferico: una tecnica per osservare l'assemblaggio della septina su microsfere

Le septine sono proteine chiave del citoscheletro che si legano alle superfici curve della membrana plasmatica.

Per osservare l'assemblaggio in vitro della septina su microsfere, in primo luogo, prendere una sospensione di microscopiche perle di silice di dimensioni uniformi, che fungono da supporto solido per la formazione del doppio strato. Agita questa sospensione per rompere eventuali grappoli di perline.

Integralo con piccole vescicole unilamellari, SUV - vescicole sferiche circondate da un singolo doppio strato lipidico. Incubare agitando costantemente, evitando che le microsfere si depositino.

Durante l'incubazione, i gruppi della testa polare esterna facilitano l'adsorbimento dei SUV sulla superficie della microsfera idrofila. Questa interazione provoca la rottura dei SUV, seguita dalla fusione dei lipidi dei SUV sulla superficie curva della microsfera come uno strato continuo, con conseguente formazione di un doppio strato lipidico sferico supportato, SLB.

Lavare per rimuovere i lipidi non legati in eccesso e risospendere nel tampone di reazione. Trasferire la sospensione SLB sferica su una piccola regione di una superficie rivestita di polietilenglicole, per evitare adsor