Saggio di mineralizzazione in vitro: un metodo colorimetrico per quantificare i depositi di calcio degli osteoblasti sul sostituto dell'innesto osseo mediante colorazione ed estrazione del rosso di alizarina

Durante la rigenerazione ossea, gli osteoblasti - cellule che formano l'osso - vengono reclutati nel sito fratturato, dove proliferano e secernono osteoidi - una matrice collagenica. Dopo un periodo di maturazione, gli osteoblasti mineralizzano l'osteoide mediante deposizione regolata di ioni calcio e fosfato, avviando una nuova sintesi ossea.

Per quantificare il grado di mineralizzazione degli osteoblasti in vitro, ottenere una sospensione primaria di osteoblasti in un terreno adatto. Seminare la sospensione in una piastra a più pozzetti contenente dischi sostitutivi dell'innesto osseo poroso e incubare.

I dischi fungono da impalcatura, consentendo l'adesione e la proliferazione cellulare.

Sostituire i terreni esauriti con terreni freschi contenenti integratori osteogenici. Incubare per un periodo prolungato. Gli integratori osteogenici stimolano gli osteoblasti a produrre e successivamente mineralizzare la matrice collagenica.

Dopo la fissazione, colorare la matrice mineralizzata con la soluzione di alizarina rossa S, ARS. L'ARS, un colorante caricato negativamente, si lega agli ioni calcio caricati positivamente nella matrice, formando un complesso di colore rosso. Rimuovere la