Saggio basato sulla luminescenza per valutare la neurotossicità dei composti in esame sui neuroni

La crescita dei neuriti, in cui i neuroni sviluppano proiezioni, è fondamentale per la funzione neurale e la rigenerazione.

Per valutare gli effetti neurotossici dei composti di prova che promuovono la crescita dei neuriti in vitro, ottenere una sospensione di cellule progenitrici neurali umane, hNPC, in mezzi di differenziazione.

Seminare le cellule in pozzetti a piastre multipozzetto rivestiti con poli-L-lisina e laminina, facilitando l'adesione delle cellule al fondo del pozzetto e supportando la crescita cellulare. I costituenti dei mezzi di differenziazione promuovono la differenziazione delle hNPC nei neuroni.

Trattare una serie di pozzetti con un composto di prova che promuove la crescita dei neuriti. Questo interagisce con i neuroni derivati da hNPC e può indurre la crescita dei neuriti, senza interrompere i processi metabolici cellulari e la successiva concentrazione di adenosina trifosfato, ATP, la principale fonte di energia cellulare.

Aggiungere il reagente in un unico passaggio contenente detergenti, enzima luciferasi e substrato luciferasi, luciferina e inibitori dell'ATPasi insieme agli ioni magnesio e mescolare.

I detergenti distruggono la membrana cellulare, provoc