Sonda peptidica biotinilata a penetrazione cellulare per rilevare le interazioni proteina-proteina

Nelle cellule, le proteine si legano alle loro proteine interagenti attraverso sequenze specifiche nella loro struttura, modulando il funzionamento delle proteine intracellulari.

Per rilevare le interazioni proteiche intracellulari, prelevare una coltura cellulare aderente. Aspirare il terreno.

Aggiungere un peptide biotinilato che penetra nelle cellule, una soluzione BCPP e incubare.

Ogni BCPP contiene una sequenza peptidica che aiuta nel legame specifico con la proteina intracellulare bersaglio. Il peptide ha un peptide che penetra nelle cellule, CPP, all'estremità N del peptide e biotina all'estremità C per una facile rilevazione.

Durante l'incubazione, la regione CPP caricata positivamente facilita l'ingresso del peptide legato attraverso la membrana cellulare, raggiungendo il citoplasma. Il peptide si lega al suo partner proteico interagente intracellulare, formando un complesso proteico BCPP-bersaglio.

Aggiungere un tampone contenente molecole detergenti che rompono la membrana cellulare e rilasciano complessi proteici bersaglio BCPP e altri componenti cellulari.

Aggiungere una soluzione di avidina legata a perle di agarosio, una glicoproteina che si lega specificamente alla