Spettroscopia di fluttuazione della fluorescenza per studiare l'omo-oligomerizzazione delle proteine
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:48 min. • July 8th, 2025
La spettroscopia di fluttuazione della fluorescenza può determinare lo stato di oligomerizzazione delle proteine in un campione.
Per iniziare, prendi un vetrino da camera contenente una soluzione di monomero proteico marcato in fluorescenza. Posizionare il vetrino sotto un microscopio confocale. Focalizzare il raggio laser su una piccola parte del campione, il volume confocale, per eccitare i monomeri proteici.
Le molecole proteiche si diffondono dentro e fuori dal volume confocale a causa del moto browniano. Questo movimento provoca rapidi cambiamenti nell'intensità della fluorescenza, portando a fluttuazioni dell'intensità della fluorescenza nel tempo.
Aggiungi l'agente dimerizzante, un ligando bivalente che aiuta due monomeri proteici a legarsi e, quindi, a formare un dimero. A causa della dimerizzazione, due etichette fluorescenti si uniscono per formare una singola particella, che aumenta l'intensità della fluorescenza per particella, la luminosità molecolare.
L'aumento della luminosità molecolare dovuto alla dimerizzazione aumenta l'ampiezza delle fluttuazioni della fluorescenza, poiché due etichette fluorescenti entrano ed escono dal volume confocale.
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