Microscopia TIRF per visualizzare la dinamica dell'accoppiamento di actina e microtubuli

I monomeri di actina polimerizzano in modo dalla testa alla coda per formare fibre sottili, chiamate microfilamenti. Allo stesso modo, i dimeri di tubulina polimerizzano in microtubuli cilindrici cavi più lunghi. Questi componenti del citoscheletro mantengono la forma cellulare e facilitano la motilità cellulare.

Per visualizzare la dinamica dell'accoppiamento actina-microtubuli mediante microscopia a riflessione interna totale, TIRF, eseguire un assemblaggio di imaging personalizzato.

Il gruppo di imaging è costituito da due vetrini coprioggetti: un vetrino coprioggetti rivestito di silano m-PEG superiore e un vetrino coprioggetti rivestito di silano biotina-PEG inferiore. I due vetrini coprioggetti sono distanziati longitudinalmente con nastro biadesivo e sigillati ad entrambe le estremità per creare un canale di flusso.

Pipettare BSA nel canale di flusso per adescare la camera. Aggiungere la soluzione di streptavidina e incubare. Le molecole di streptavidina si legano alle molecole di biotina attaccate al PEG-silano del vetrino coprioggetti inferiore.

Fluire il buffer TIRF nel canale. Aggiungere una soluzione di miscela di citoscheletro contenente dimeri di tubulina non marcati