JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 5:05 min. • July 8th, 2025
La microscopia a foglio di luce su reticolo, LLSM, consente la visualizzazione delle interazioni cellula-recettore-ligando in cellule vive con un'elevata risoluzione spaziotemporale.
Prelevare un vetrino coprioggetti contenente cellule che esprimono il ligando trasdotto che emettono fluorescenza rossa. Fissare il vetrino coprioggetti con la cella rivolta verso l'alto su un portacampioni ingrassato. Fissare il supporto sul piezo di un tavolino per microscopio per consentire il posizionamento e la scansione precisi del campione durante l'imaging. Regolare le impostazioni del software per concentrarsi su una singola cellula che esprime il ligando.
Pipettare la sospensione cellulare che esprime il recettore sul vetrino coprioggetti. I recettori sono marcati con anticorpi verdi marcati con fluoroforo. Immagina le coppie di celle interagenti.
Il laser di eccitazione del microscopio emette un raggio laser circolare a polarizzazione lineare che passa attraverso lenti cilindriche per creare un foglio di luce. Il foglio di luce viene proiettato su un modulatore che rimuove la diffrazione in eccesso e la trasforma in un reticolo ultrasottile.
Il foglio di luce a reticolo illumina una sezione
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