JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:56 min. • July 8th, 2025
I nucleosomi – unità ripetitive del DNA eucariotico – sono costituiti da segmenti di DNA avvolti attorno a nuclei proteici istonici. Lo srotolamento del DNA attorno al nucleo dell'istone è fondamentale per la dinamica dei nucleosomi.
Per catturare la dinamica dei nucleosomi, iniziare con un substrato di mica liscio e funzionalizzato montato su un microscopio a forza atomica, AFM, stadio scanner. Sovrapporre il substrato con un tampone contenente nucleosomi.
Il DNA nucleosomiale caricato negativamente interagisce con le cariche positive sulla mica funzionalizzata, immobilizzandole sulla superficie. Lavare il substrato di mica immobilizzato con un tampone per evitare il sovraffollamento dei nucleosomi.
Trasferire lo stadio dello scanner contenente nucleosomi in una camera di imaging contenente un cantilever premontato, con una punta sul bordo e rivolta verso l'alto verso i nucleosomi.
Riempire la camera con un tampone di imaging. Allineare il raggio laser sul retro del cantilever per garantire misurazioni accurate della deflessione.
La punta AFM oscilla vicino ai nucleosomi completamente avvolti e scansiona la superficie per misurare l'altezza dei nucleosomi a intervalli regolari.
Lo
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