JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 8:15 min. • July 8th, 2025
Il glicogeno, un polimero ramificato del glucosio, è una riserva di energia nei compartimenti intermiofibrillari subcellulari, intramiofibrillari e subsarcolemmali all'interno del muscolo scheletrico umano.
Per quantificare la distribuzione subcellulare del glicogeno utilizzando la microscopia elettronica a trasmissione, TEM, si ottiene tessuto muscolare scheletrico umano isolato. Fissare con glutaraldeide per preservare la struttura dei tessuti. Postfissare il tessuto in una soluzione di tetrossido di osmio e ferrocianuro di potassio.
Il complesso ossimio-ferrocianuro ridotto si lega ai gruppi ossidrilici nel glicogeno, migliorando il contrasto delle particelle di glicogeno nel muscolo. Inoltre, le membrane e il reticolo sarcoplasmatico – un organello legato alla membrana – si macchiano.
Disidratare il tessuto aumentando le concentrazioni di etanolo. Incastonare in resina, formando un blocco solido. Ottenere sezioni ultrasottili con fibre muscolari orientate longitudinalmente; trasferimento su griglie GST.
Immergere le griglie in acetato di uranile, soluzione di metalli pesanti. Gli ioni uranile si legano ai lipidi e alle proteine caricati negativamente, rendendoli densi di elettr
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