Microscopia a fluorescenza intravitale per studiare la formazione di trombi microvascolari
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 5:54 min. • July 8th, 2025
La microscopia a fluorescenza intravitale è utile per studiare l'induzione fototossica della formazione di un trombo - un coagulo di sangue - in un sito di lesione microvascolare.
Inizia prendendo un topo glabro anestetizzato iniettato con un polisaccaride fototossico marcato con fluoroforo. Posizionare il mouse in posizione prona su una piattaforma riscaldante per mantenere la temperatura fisiologica per una corretta circolazione sanguigna.
Posizionare la parte apicale dell'orecchio sotto un microscopio a fluorescenza intravitale. Dopo l'eccitazione con la luce, il fluoroforo emette fluorescenza, consentendo il monitoraggio del flusso sanguigno microvascolare. Aumentare l'intensità della luce per indurre la formazione di trombi.
Il fluoroforo assorbe la luce ad alta intensità e reagisce con l'ossigeno molecolare per generare specie reattive dell'ossigeno. Queste molecole causano stress ossidativo nelle cellule endoteliali, portando così al danno cellulare e all'esposizione della matrice subendoteliale.
Le cellule danneggiate rilasciano mediatori trombotici che collegano il collagene esposto nella matrice subendoteliale e le piastrine circolanti, che si legano ai mediatori tramite
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