JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:47 min. • July 8th, 2025
Le fosforilazioni multiple in una proteina comportano l'aggiunta di gruppi fosfato alla proteina in varie posizioni, in particolare ai residui di serina e treonina.
Per identificare più fosforilazioni in una proteina, iniziare con una provetta contenente proteine fosforilate marcate con azoto-15, che aiuta a differenziare gli idrogeni ammidici dagli altri idrogeni nella proteina.
Aggiungere un composto di riferimento NMR interno per una misurazione accurata delle frequenze di risonanza relative. Trasferire la miscela in un tubo di risonanza magnetica nucleare, o NMR. Inserire il tubo in un'apertura rotante e posizionarlo in uno spettrometro NMR.
La presenza di fosfati mostra effetti di ritiro di elettroni nei residui fosforilati di serina e treonina. Di conseguenza, gli idrogeni ammidici dei residui fosforilati sembrano essere deschermati con densità di elettroni inferiori rispetto agli altri idrogeni ammidici.
Gli idrogeni ammidici con ambienti elettronici variabili sperimentano campi magnetici differenziali attorno ai nuclei, raggiungendo stati di bassa energia.
Applicare un breve impulso a radiofrequenza per eccitare i nuclei di idrogeno a uno stato energetico più elevato a una
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