La tecnica di spettroscopia del dicroismo circolare per studiare le interazioni DNA-proteina
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Tecniche Biologiche
0 visualizzazioni • 4:38 min. • July 8th, 2025
proteine di rimodellamento della cromatina ATP-dipendenti regolano l'espressione genica nella cromatina strettamente impacchettata alterando la conformazione del DNA in modo ATP-dipendente.
Per studiare le interazioni rimodellatore della cromatina-DNA utilizzando il dicroismo circolare, o spettroscopia CD, prendere una soluzione di oligonucleotidi di DNA a doppio filamento. Scaldare per denaturare gli oligonucleotidi e metterli sul ghiaccio.
Il raffreddamento rapido provoca la rinatura del DNA mentre forma strutture secondarie. La regione di transizione da doppio a singolo filamento fornisce un sito di legame ottimale per i rimodellatori della cromatina.
Aggiungi il DNA raffreddato a caldo in una cuvetta. Aggiungere un tampone contenente rimodellatore della cromatina ATP-dipendente, ATP e ioni magnesio.
Il rimodellatore si lega al DNA, seguito dal legame dell'ATP complessato con ioni magnesio alla proteina, attivandola. Il rimodellatore attivato idrolizza l'ATP, inducendo una conformazione stem-loop nel DNA.
Far passare la luce polarizzata circolarmente a sinistra e a destra, con una differenza di fase di 90°, attraverso il campione. Il DNA otticamente chirale assorbe la luce po
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