Quantificazione dell'infezione batterica nelle cellule ospiti mediante il saggio dell'unità formante colonia

Per iniziare il test dell'unità formante colonie, o CFU, per quantificare i batteri vitali, prelevare una piastra multipozzetto contenente macrofagi coltivati in terreni di crescita. Infettare i macrofagi con Listeria monocytogenes, un batterio patogeno in grado di crescere intracellulare.

Durante l'infezione, i macrofagi inghiottono i batteri, internalizzando i batteri all'interno di un compartimento legato alla membrana, un fagosoma.

I batteri secernono una tossina che forma i pori e interrompono la membrana fagosomiale. In questo modo, i batteri possono entrare nel citosol e replicarsi all'interno dei macrofagi.

Trattare brevemente i macrofagi infetti con gentamicina, un antibiotico che elimina selettivamente i batteri non internalizzati preservando i batteri intracellulari.

Aspirare il terreno sovrastante contenente antibiotici. Successivamente, aggiungi acqua distillata sterile sui macrofagi infetti, creando un ambiente ipotonico. Questo porta all'osmosi, in cui le molecole d'acqua entrano nelle cellule e causano la lisi dei macrofagi, rilasciando i componenti intracellulari, compresi i batteri.

Stendere il lisato cellulare contenente batteri intracellulari sulla piastra di ag