Analisi con Citometria a Flusso di Listeria monocytogenes intracellulare ed extracellulare emergente in vitro

Prendi una piastra a più pozzetti contenente una coltura di macrofagi. Infettare con Listeria monocytogenes che esprime proteine fluorescenti, Lm.

Le proteine su Lm si legano a specifici recettori macrofagici, internalizzando i batteri all'interno di un fagosoma. Inoltre, Lm secerne tossine che formano pori che distruggono la membrana del fagosoma, rilasciando batteri nel citosol, dove si replicano e vengono circondati da filamenti di actina ospite.

Le proteine ActA che inducono l'assemblaggio dell'actina su Lm inducono una polimerizzazione continua dell'actina nella parte posteriore del batterio. La coda della cometa di actina generata spinge Lm attraverso il citosol e penetra la membrana cellulare dei macrofagi, rilasciando Lm polimerizzato avvolto da actina nel mezzo.

Dopo l'incubazione, raccogliere e fissare i terreni extracellulari, legati all'actina, contenenti Lm da una serie di pozzetti. Fissare il Lm utilizzando la paraformaldeide. Aggiungere acqua distillata, rompendo i macrofagi e rilasciando la Lm intracellulare. Raccogliere la Lm intracellulare e fissare il campione utilizzando la paraformaldeide.

In altri pozzetti, sostituire i terreni con terreni contenenti gentamici