Misurazione della carica batterica di E. coli in Drosophila melanogaster a seguito di infezione da E. coli

Inizia con mosche adulte di Drosophila melanogaster iniettate con E. coli. Nei momenti desiderati dopo l'iniezione, trasferire i moscerini anestetizzati in provette da microcentrifuga separate su ghiaccio, riducendo la loro attività metabolica.

Aggiungere un tampone e omogeneizzare i moscerini, rompendo il tessuto, rilasciando E. coli e microbiota intestinale endogeno.

Trasferire ciascun omogeneizzato di mosca contenente E. coli in pozzetti a piastre a più pozzetti. Riempire i pozzetti rimanenti con il tampone. Eseguire la diluizione seriale dell'omogenato contenente E. coli.

Depositare la sospensione omogenata diluita da ciascun pozzetto in punti discreti su una piastra di agar nutriente, iniziando dalla diluizione più bassa. Lascia che le macchie si assorbano nell'agar. Incubare la piastra durante la notte per consentire la moltiplicazione di E. coli, formando colonie visibili. La durata dell'incubazione è fondamentale per prevenire la formazione di colonie di microbiota intestinale endogeno della mosca.

Contare le colonie di E. coli per ogni mosca dalle diluizioni con colonie numerabili non sovrapposte. Calcolare l'unità formante colonia - la carica batterica vitale - nell'omoge