JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:02 min. • July 8th, 2025
Prelevare una piastra di analisi contenente macrofagi innescati con lipopolisaccaride.
Il priming aumenta l'espressione dei precursori delle citochine pro-infiammatorie inattive e delle proteine NLRP3.
Aggiungere la nigericina, uno ionoforo di potassio, che favorisce l'efflusso di ioni. Questo interrompe i livelli intracellulari di potassio, innescando le proteine NLRP3, per formare un grande complesso.
NLRP3 oligomerizzato recluta le proteine adattatrici, ASC, causandone la polimerizzazione. I filamenti ASC reclutano la pro-caspasi-1, formando NLRP3-inflammasoma, un complesso multiproteico.
La pro-caspasi-1 subisce un'autoattivazione indotta dalla prossimità, generando la caspasi-1. La caspasi-1 scinde la citochina pro-infiammatoria e la proteina gasdermin-D, creando un poro della membrana plasmatica.
Ciò provoca la secrezione di citochine e la morte cellulare programmata infiammatoria, la piroptosi, il rilascio di contenuti intracellulari, tra cui la lattato deidrogenasi o LDH. Raccogli il surnatante contenente LDH.
Aggiungere la miscela di substrato: lattato, iodonitrotetrazolio viola o colorante INT, NAD+ e diaforasi. L'LDH ossida il lattato a piruvato riducendo il NAD+. La dia
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