JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:57 min. • July 8th, 2025
Prendi una provetta di vetro contenente neutrofili omogeneizzati con componenti intracellulari rilasciati.
Aggiungere metanolo, un solvente polare, che interrompe le interazioni lipidi-lipidi e lipidi-proteine. La polarità intrinseca del metanolo distribuisce uniformemente i lipidi polari, solubilizzandoli. Successivamente, aggiungi il cloroformio, un solvente organico non polare, che interagisce con i lipidi non polari, causandone la dispersione e la solubilizzazione.
Centrifugare per separare il pellet contenente proteine dal surnatante contenente lipidi, polisaccaridi e detriti cellulari. Trasferire il surnatante in un tubo di vetro fresco. Aggiungere il cloroformio e l'acqua distillata. Centrifugare il campione.
L'aggiunta di acqua forma spontaneamente un sistema bifasico, suddividendo le biomolecole all'interno degli strati inferiori di cloroformio e acqua-metanolo superiori.
Lo strato di cloroformio comprende lipidi non polari disciolti, mentre lo strato superiore contiene contaminanti non lipidici e lipidi più polari. Rimuovere lo strato superiore di acqua-metanolo senza disturbare lo strato contenente lipidi.
Utilizzare un concentratore sottovuoto per rimuovere il solvente
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