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Immunologia
0 visualizzazioni • 2:49 min • July 8th, 2025
Prendi un topo anestetizzato con le orecchie depilate e applica l'antigene del test - un aptene mescolato in una soluzione veicolare adatta - sulla pelle esposta. La soluzione veicolo facilita la penetrazione dell'aptene attraverso lo strato epidermico più esterno per raggiungere il derma sottostante.
L'aptene si lega alle proteine della pelle, formando un immunogeno riconosciuto dalle cellule presentanti l'antigene o APC. Dopo l'inghiottimento, le APC elaborano e visualizzano l'immunogeno sulla loro superficie.
Le APC migrano verso i linfonodi, presentando l'immunogeno alle cellule T naive e attivandole. Le cellule attivate si differenziano in cellule T di memoria innescate, un sottoinsieme delle quali migra verso la pelle.
Dopo la riesposizione all'aptene, le APC presentano l'immunogeno alle cellule T innescate, inducendo il rilascio di citochine pro-infiammatorie.
Le citochine innescano i cheratinociti e i mastociti a rilasciare chemochine, che si legano ai neutrofili circolanti, facilitandone lo stravaso. I neutrofili stravasati raggiungono il sito di infiammazione.
Le citochine attivano i neutrofili per produrre enzimi proteolitici e specie reattive dell'ossigeno, causando danni ai tessuti e amplificando l'infiammazione.
Per iniziare, anestetizzare il topo con un'iniezione intraperitoneale di un cocktail anestetico e confermare un'adeguata sedazione con un test di pizzicamento delle dita. Quindi, applicare la crema depilatoria sulla superficie dorsale di entrambe le orecchie. Puliscilo entro un minuto e lava la pelle con acqua.
Misurare lo spessore dell'orecchio in cui sono state effettuate le applicazioni utilizzando un micrometro. Successivamente, rimetti il topo nella sua gabbia dopo che si è ripreso dall'anestesia e lascia riposare il topo per almeno tre giorni prima di ulteriori test.
Dopo tre giorni, anestetizzare nuovamente il topo e misurare nuovamente lo spessore dell'orecchio per assicurarsi che non sia irritato. Quindi, applicare 12,5 microlitri di oxazolone all'1,25% su ciascun lato dell'orecchio destro e applicare 12,5 microlitri della soluzione di acetone-olio d'oliva su ciascun lato dell'orecchio sinistro.
Come sempre, osserva il topo riprendersi dall'anestesia. 24 ore dopo, misura nuovamente lo spessore dell'orecchio in anestesia, per assicurarti che si sia verificata l'infiammazione cutanea indotta dall'oxazolone.