JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:25 min. • July 8th, 2025
Prendi una piastra multipozzetto contenente macrofagi.
Aggiungere Cryptococcus neoformans ai pozzetti di prova, mentre i pozzetti di controllo contengono solo macrofagi.
I macrofagi fagocitano i funghi all'interno dei fagosomi.
Lavare con tampone per rimuovere i funghi non fagocitati. Aggiungere terreni privi di antibiotici. Incubare.
Il fagosoma si fonde con il lisosoma, formando un fagolisosoma. I funghi modulano il pH fagolisosomico e possiedono meccanismi intrinseci per sopravvivere a condizioni fagolisosomiali difficili. I funghi permeabilizzano la membrana fagolisososomiale e si replicano, accompagnati da accumulo citosolico di vescicole piene di polisaccaridi.
La residenza e la replicazione fungina intracellulare causano danni cellulari, innescando vie di morte cellulare. Ciò provoca la lisi dei macrofagi e il rilascio di contenuto intracellulare, inclusa la lattato deidrogenasi o LDH, nei terreni.
Raccogli i media contenenti LDH in momenti diversi. Lisi i macrofagi di controllo in momenti simili per ottenere il massimo rilascio di LDH cellulare. Aggiungere la miscela di analisi al terreno raccolto e ai lisati. L'LDH converte il lattato in piruvato, riducendo il NAD+. La dia
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