Estrazione del lisato di cellule ospiti da cellule ospiti infette coltivate in un sistema a membrana permeabile

Inizia seminando le cellule ospiti dei mammiferi nel compartimento inferiore di un sistema di membrane permeabili.

Aggiungere lo streptococco, un batterio patogeno noto per secernere streptolisina S o tossina SLS, all'inserto della membrana. La tossina SLS si diffonde attraverso il poro della membrana e raggiunge la cellula ospite.

I cotrasportatori sodio-bicarbonato legati alla membrana regolano il trasporto ionico, mantenendo l'omeostasi cellulare. La tossina si lega a questi cotrasportatori, interrompendo il trasporto ionico e causando stress osmotico nelle cellule ospiti.

Questo attiva diverse cascate di segnalazione a valle, tra cui p38 MAPK, una via della proteina chinasi attivata dal mitogeno. La p38 MAPK attivata fosforila i suoi bersagli a valle, avviando una risposta cellulare contro i batteri.

Quindi, rimuovere l'inserto della membrana permeabile. Aspirare il terreno sopra le cellule ospiti. Aggiungere il tampone di lisi per rilasciare il contenuto cellulare. Centrifugare per pellettare i detriti della cella.

Raccogliere il surnatante contenente componenti solubili del lisato e il pellet contenente componenti insolubili del lisato. Conservare i campioni per ulteriori ana