JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:43 min. • July 8th, 2025
Prendi una camera di imaging contenente una coltura di cellule epiteliali umane caricate con un indicatore fluorescente di calcio intracellulare.
Aggiungere un terreno di coltura contenente ioni calcio. Introdurre Shigella, un batterio patogeno, e incubare.
Il sistema di secrezione batterica penetra nella cellula ospite e rilascia gli effettori di invasione. L'invasione innesca il riarrangiamento dell'actina, formando arruffamenti della membrana attorno ai batteri.
Nel sito di invasione, la fosfolipasi C, o PLC, sulla membrana plasmatica viene attivata e i recettori dell'inositolo trifosfato si raggruppano sul reticolo endoplasmatico o ER.
Il PLC idrolizza il fosfatidilinositolo 4,5-bisfosfato di membrana in inositolo trifosfato, o IP3, che si accumula localmente a causa della fitta rete di actina.
IP3 si lega ai recettori sull'ER, causando il rilascio di calcio. Gli indicatori del calcio si legano agli ioni rilasciati ed emettono fluorescenza, mostrando una risposta locale del calcio.
IP3 si diffonde lentamente attraverso l'actina, esaurendo ulteriormente il livello di calcio dell'ER e attivando un canale del calcio della membrana plasmatica, portando all'afflusso di calcio.
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