Analisi delle sinapsi immunitarie tra cellule T umane e cellule Raji caricate con SEB mediante citometria a flusso di imaging

Prelevare provette per citometria a flusso contenenti cellule di Raji non caricate e cellule di Staphylococcus aureus enterotossina B o cellule di Raji caricate con SEB.

Queste cellule Raji caricate con SEB funzionano come cellule B surrogate presentanti l'antigene contenenti il superantigene SEB complessato a molecole MHC di classe II.

Incubare con pan-leucociti.

I recettori delle cellule T, i TCR sulle cellule T, si legano ai SEB sulle cellule Raji, che, insieme ai segnali co-stimolatori, stabiliscono una giunzione cellula-cellula stabile, una sinapsi immunitaria, che porta all'attivazione delle cellule T.

Questo innesca le vie di segnalazione intracellulare, causando il riarrangiamento del citoscheletro di actina, con il raggruppamento di molecole di segnalazione e recettori di superficie all'interno della sinapsi.

Dopo l'incubazione, fissare le cellule per preservarne le strutture cellulari. Permeabilizzare le cellule per accedere a bersagli intracellulari.

Aggiungere gli anticorpi anti-CD3 marcati con fluorofori, la falloidina e il DAPI, che si legano rispettivamente al CD3 nel complesso TCR, ai filamenti di actina e al DNA.

Utilizzando un citometro a flusso per immagini, visu