Un test per studiare la regolazione della fagocitosi dei macrofagi da parte delle cellule staminali mesenchimali

Prelevare una piastra multipozzetto con cellule staminali mesenchimali, o MSC, in pozzetti selezionati.

Introdurre macrofagi e incubare, facilitando l'interazione MSC-macrofagi nei pozzetti di co-coltura.

Aggiungere lo zimosano, un componente della parete cellulare del lievito, coniugato a un fluoroforo sensibile al pH a tutti i pozzetti.

I recettori scavenger dei macrofagi si legano allo zimosoma, innescando il suo inghiottimento all'interno di un fagosoma, che si fonde con un lisosoma per formare un fagolisosoma.

Un pH acido all'interno del fagolisosoma fa sì che il fluoroforo emetta fluorescenza.

Nei pozzi di co-coltura, le MSC proiettano nanotubi tunneling, o TNT, estensioni citoplasmatiche che fanno da ponte con i macrofagi. I mitocondri delle MSC viaggiano attraverso il TNT per entrare nei macrofagi, aumentando il numero totale di mitocondri funzionali.

Un numero mitocondriale elevato aumenta la produzione di adenosina trifosfato o ATP, che alimenta il fabbisogno energetico per un aumento della fagocitosi.

Registrare l'intensità della fluorescenza nel tempo dagli zimosani internalizzati coniugati con fluorofori.

La co-coltura mostra un aumento della fluorescenza rispetto ai p