Misurazione del carico in vivo di batteri che esprimono la luciferasi in una larva di insetto

Per misurare la carica batterica in vivo, iniziare con larve di insetti sterilizzate pre-infettate con Bacillus Calmette-Guérin, o BCG lux. BCG lux è un ceppo BCG di Mycobacterium bovis geneticamente modificato che esprime luciferasi, un enzima che produce bioluminescenza.

Trasferire una larva di insetto in una provetta a matrice lisanti contenente tampone con sfere d'acciaio. Utilizzando un omogeneizzatore, omogeneizzare la larva, rilasciando i componenti intracellulari, compresi i batteri, nel tampone.

Centrifugare la provetta per raccogliere l'omogeneizzato e trasferirla in una provetta luminometrica.

Lavare la provetta della matrice con un tampone contenente detergente per solubilizzare i frammenti cellulari e rilasciare i batteri residui.

Combina le frazioni nello stesso tubo del luminometro e aggiungi il substrato di luciferasi. I substrati entrano nei batteri e interagiscono con gli enzimi luciferasi, con conseguente bioluminescenza. Caricare il tubo in un luminometro e misurare la bioluminescenza.

Il luminometro misura l'intensità della luce emessa e calcola l'unità di luce relativa, o RLU, indicativa del carico in vivo di BCG in una larva di insetto.

Stendere la sospension