Name: Intraspinale trapianto di cellule cervicali targeting per corno ventrale nella Sclerosi Laterale Amiotrofica e le lesioni traumatiche del midollo spinale (Video) | JoVE Journal
Uploaded: 2011-09-18T14:00:00.000+00:00
Duration: 10 min 49 s
Description: Impara il trapianto intraspinale di cellule precursori neurali nel midollo spinale cervicale per proteggere i motoneuron frenici nei modelli di SLA e lesioni spinali. Questo protocollo dettagliato guida la sopravvivenza cellulare.

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Vorrei ringraziare: tutti i membri del Lepore, Maragakis Rothstein e laboratori di discussione utile; Il Veterans Paralizzato d&#39;America e la Craig H. Neilsen Fondazione per il finanziamento.

<ol><li>Lane, M. A., Fuller, D. D., White, T. E. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+recovery+following+high+cervical+hemisection%5BTitle%5D)+AND+%22Trends+in+neurosciences%22%5BJournal%5D)">Respiratory recovery following high cervical hemisection.</a> Trends in neurosciences. 31, 538-538 (2008).</li>
<li>Kaplan, L. M., Hollander, D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Respiratory+dysfunction+in+amyotrophic+lateral+sclerosis%5BTitle%5D)+AND+%22Clin.+Chest.+Med%22%5BJournal%5D)">Respiratory dysfunction in amyotrophic lateral sclerosis.</a> Clin. Chest. Med. 15, 675-675 (1994).</li>
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<li>Bruijn, L. I., Becher, M. W., Lee, M. K. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((ALS-linked+SOD1+mutant+G85R+mediates+damage+to+astrocytes+and+promotes+rapidly+progressive+disease+with+SOD1-containing+inclusions%5BTitle%5D)+AND+%22Neuron%22%5BJournal%5D)">ALS-linked SOD1 mutant G85R mediates damage to astrocytes and promotes rapidly progressive disease with SOD1-containing inclusions.</a> Neuron. 18, 327-327 (1997).</li>
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<li>Howland, D. S., Liu, J., She, Y. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+loss+of+the+glutamate+transporter+EAAT2+in+a+transgenic+rat+model+of+SOD1+mutant-mediated+amyotrophic+lateral+sclerosis+%28ALS%29%5BTitle%5D)+AND+%22Proc+Natl+Acad+Sci%22%5BJournal%5D)">Focal loss of the glutamate transporter EAAT2 in a transgenic rat model of SOD1 mutant-mediated amyotrophic lateral sclerosis (ALS).</a> Proc Natl Acad Sci. 99, 1604-1604 (2002).</li>
<li>Nagai, M., Aoki, M., Miyoshi, I. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Rats+expressing+human+cytosolic+copper-zinc+superoxide+dismutase+transgenes+with+amyotrophic+lateral+sclerosis%3A+associated+mutations+develop+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Rats expressing human cytosolic copper-zinc superoxide dismutase transgenes with amyotrophic lateral sclerosis: associated mutations develop motor neuron disease.</a> J. Neurosci. 21, 9246-9246 (2001).</li>
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<li>Gage, F. H. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Mammalian+neural+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Science%22%5BJournal%5D)">Mammalian neural stem cells.</a> Science. 287, 1433-1433 (2000).</li>
<li>Lane, M. A., Lee, K. Z., Fuller, D. D. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Spinal+circuitry+and+respiratory+recovery+following+spinal+cord+injury%5BTitle%5D)+AND+%22Respiratory+physiology+%26+neurobiology%22%5BJournal%5D)">Spinal circuitry and respiratory recovery following spinal cord injury.</a> Respiratory physiology & neurobiology. 169, 123-123 (2009).</li>
<li>Lepore, A. C., Rauck, B., Dejea, C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Focal+transplantation-based+astrocyte+replacement+is+neuroprotective+in+a+model+of+motor+neuron+disease%5BTitle%5D)+AND+%22Nature%22%5BJournal%5D)">Focal transplantation-based astrocyte replacement is neuroprotective in a model of motor neuron disease.</a> Nature. 11, 1294-1294 (2008).</li>
<li>Rao, M. S. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Multipotent+and+Restricted+Precursors+in+the+Central+Nervous+System%5BTitle%5D)+AND+%22Anat+Rec%22%5BJournal%5D)">Multipotent and Restricted Precursors in the Central Nervous System.</a> Anat Rec. 257, 137-137 (1999).</li>
<li>Rao, M. S., Mayer-Proschel, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Glial-+restricted+precursors+are+derived+from+multipotent+neuroepithelial+stem+cells%5BTitle%5D)+AND+%22Dev+Biol%22%5BJournal%5D)">Glial- restricted precursors are derived from multipotent neuroepithelial stem cells.</a> Dev Biol. 188, 48-48 (1997).</li>
<li>Suzuki, M., Tork, C., Shelley, B. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+dimorphism+in+disease+onset+and+progression+of+a+rat+model+of+ALS.+Sexual+dimorphism+in+disease+onset+and+progression+of+a+rat+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Amyotroph+Lateral+Scler%22%5BJournal%5D)">Sexual dimorphism in disease onset and progression of a rat model of ALS. Sexual dimorphism in disease onset and progression of a rat model of ALS.</a> Amyotroph Lateral Scler. 8, 20-20 (2007).</li>
<li>Lepore, A. C., Haenggeli, C., Gasmi, M. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Intraparenchymal+spinal+cord+delivery+of+adeno-associated+virus+IGF-1+is+protective+in+the+SOD1G93A+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Brain+research%22%5BJournal%5D)">Intraparenchymal spinal cord delivery of adeno-associated virus IGF-1 is protective in the SOD1G93A model of ALS.</a> Brain research. 1185, 256-256 (2007).</li>
<li>Veldink, J. H., Bar, P. R., Joosten, E. A. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Sexual+differences+in+onset+of+disease+and+response+to+exercise+in+a+transgenic+model+of+ALS%5BTitle%5D)+AND+%22Neuromuscul+Disord%22%5BJournal%5D)">Sexual differences in onset of disease and response to exercise in a transgenic model of ALS.</a> Neuromuscul Disord. 13, 737-737 (2003).</li>
<li>Shumsky, J. S., Lepore, A. C. <a target="_blank" href="http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed?term=((Transplantation+of+Neuronal+and+Glial+Restricted+Precursors+into+Contused+Spinal+Cord+Improves+Bladder+and+Motor+Functions%2C+Decreases+Thermal+Hypersensitivity%2C+and+Modifies+Intraspinal+Circuitry%5BTitle%5D)+AND+%22J.+Neurosci%22%5BJournal%5D)">Transplantation of Neuronal and Glial Restricted Precursors into Contused Spinal Cord Improves Bladder and Motor Functions, Decreases Thermal Hypersensitivity, and Modifies Intraspinal Circuitry.</a> J. Neurosci. 25, 9624-9624 (2005).</li>
</ol>

Nessun conflitto di interessi dichiarati.

Per gli studi che coinvolgono topi G93A SOD1 e ratti, età e sesso-match degli animali all&#39;interno di un gruppo, e distribuire animali all&#39;interno della stessa cucciolata a gruppi diversi. E &#39;preferibile utilizzare tutti gli animali del sesso stesso per entrambi i modelli di SLA e SIC, perché i processi di malattia possono differire tra maschi e femmine, tuttavia, può anche essere utile avere abbastanza animali da entrambi i sessi per individuare possibili sesso-specifici effetti, come questo fenom...

<table border="1"><tbody><tr><td> Nome del reagente </td><td> Azienda </td><td> Numero di catalogo </td></tr><tr><td> HBSS </td><td> Gibco </td><td> 14170 </td></tr><tr><td> 0,05% tripsina </td><td> Gibco </td><td> 25300 </td></tr><tr><td> Inibitore della tripsina di soia (opzionale) </td><td> Sigma </td><td> T-6522 </td></tr><tr><td> Acepromazina maleato (0,7 mg / kg) </td><td> Fermentazione Animal Health </td><td></td></tr><tr><td> Ketamina (95 mg / kg) </td><td> Fort Dodge Animal Health </td><td></td></tr><tr><td> Xylazina (10 mg / kg) </td><td> Bayer </td><td></td></tr><tr><td> # 11 Feather lama chirurgica </td><td> Electron Microscopy Sciences </td><td> 72044-11 </td></tr><tr><td> Punte di cotone (6 pollici) </td><td> Pescatore </td><td> 23-400-101 </td></tr><tr><td> Rat-pinza dentata </td><td> Strumenti Scienza multa </td><td> Ratto: 11023-15; Mouse: 11042-08 </td></tr><tr><td> Medie imprese primavera forbici </td><td> Strumenti Scienza multa </td><td> 15012-12 </td></tr><tr><td> Mini primavera forbici </td><td> Strumenti Scienza multa </td><td> 15000-10 </td></tr><tr><td> Pinza ossivora </td><td> Strumenti Scienza multa </td><td> Ratto: 16121-14; Mouse: 16221-14 </td></tr><tr><td> Microknife </td><td> Strumenti Scienza multa </td><td> 10056-12 </td></tr><tr><td> Ago titolari </td><td> Strumenti Scienza multa </td><td> 12502-14 </td></tr><tr><td> Sutura: 4-0 </td><td> Vicryl </td><td> S-183 </td></tr><tr><td> Staples: 9 mm </td><td> Autoclip </td><td> 427631 </td></tr><tr><td> Cucitrice: 9 mm (Reflex # 203-1000) </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> 5000344 </td></tr><tr><td> Pompa acqua calda (T / pompa) </td><td> Gaymar </td><td> P / N 07999-000 </td></tr><tr><td> Ciclosporina A: 250,0 mg/5.0 ml fiale </td><td> Novartis / Sandimmune </td><td> NDC 0078-0109-01 </td></tr><tr><td> FK-506 </td><td> LC Laboratori </td><td> F-4900 </td></tr><tr><td> Rapamicina </td><td> LC Laboratori </td><td> R-5000 </td></tr><tr><td> Iniettore </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> UMP2 </td></tr><tr><td> Micro 4 controller pompa Microsiringa </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> UMC4 </td></tr><tr><td> Micromanipolatore </td><td> Mondo Strumenti di precisione </td><td> Kite-R </td></tr><tr><td> 10,0 siringa Hamilton microlitri </td><td> Hamilton </td><td> 80030 </td></tr><tr><td> Aghi Hamilton: 33-gauge, smusso a 45 °, 1 pollice </td><td> Hamilton </td><td> 7803-05 </td></tr><tr><td> Pipette di vetro 20,0 microlitri microcapillare (opzionale) </td><td> Kimble </td><td> 71900-20 </td></tr></tbody></table>

intraspinale trapianto di cellule cervicali targeting per corno ventrale nella sclerosi laterale amiotrofica e le lesioni traumatiche del midollo spinale

Intraspinal Cell Transplantation for Targeting Cervical Ventral Horn in Amyotrophic Lateral Sclerosis and Traumatic Spinal Cord Injury

Compromissione respiratoria a causa della perdita dei motoneuroni frenico è una conseguenza debilitante di gran parte delle risorse umane lesioni traumatiche del midollo spinale (SCI) casi 1 ed è la causa ultima di morte nei pazienti con la malattia del motoneurone, sclerosi laterali amiotrofica (SLA) 2. La SLA è una malattia neurologica devastante che è caratterizzata da degenerazione relativamente rapido di neuroni motori superiori ed inferiori. I pazienti alla fine soccombere alla malattia in media 2-5 anni dopo la diagnosi a causa della paralisi respiratoria a causa della perdita dei motoneuroni innnervation frenico del diaframma 3. La stragrande maggioranza dei casi sono sporadici, mentre il 10% sono della forma familiare. Circa il venti per cento dei casi familiari sono legati a mutazioni puntiformi diverse nel Cu / Zn superossido dismutasi 1 (SOD1) del gene sul cromosoma 21 4. Topi transgenici 4,5 e 6 ratti trasporto umano SOD1 mutante geni (G93A, G37R, G86R, G85R) sono stati generati, e, nonostante l&#39;esistenza di altri modelli animali di perdita dei motoneuroni, sono attualmente i modelli più utilizzati altamente della malattia . Lesioni del midollo spinale (SCI) è un insieme eterogeneo di condizioni derivanti da traumi fisici al midollo spinale, con risultato funzionale variabile a seconda del tipo di posizione, e la gravità delle lesioni 7. Tuttavia, circa la metà dei casi umani SCI influenzare regioni cervicale, con conseguente debilitante disfunzioni respiratorie a causa di frenico perdita di neuroni motori e lesioni a discendente assoni respiratorie bulbospinal 1. Un certo numero di modelli animali di SCI sono stati sviluppati, con i più usati e clinicamente rilevanti è la contusione 8. Il trapianto di varie classi di cellule precursori neurali (NPC) è una promettente strategia terapeutica per il trattamento di lesioni traumatiche del SNC e neurodegenerazione, tra SLA e SCI, a causa della possibilità di sostituire neuroprotezione persi o SNC disfunzionale tipi di cellule, fornire e distribuire i fattori gene di interesse 9. Modelli animali di sclerosi laterale amiotrofica e SCI sia possibile modellare molti aspetti clinicamente rilevanti di queste malattie, tra cui la perdita frenico neurone motore e la conseguente compromissione respiratoria 10,11. Al fine di valutare l&#39;efficacia della NPC strategie basate sulla funzione respiratoria in questi modelli animali di sclerosi laterale amiotrofica e SCI, interventi cellulare deve essere specificamente indirizzato alle regioni contenenti terapeuticamente obiettivi importanti come i neuroni motori frenico. Forniamo un protocollo dettagliato per il multi-segmentale, il trapianto intraspinale di NPC nel midollo spinale cervicale materia grigia ventrale dei modelli neurodegenerative come topi G93A SOD1 e ratti, così come i ratti con lesione spinale e topi 11.

Trapianto precursore neurale è una strategia promettente per la protezione e / o la sostituzione di perduti / disfunzionale neuroni motori frenico cervicale nelle lesioni del midollo spinale (SCI) e la malattia del motoneurone, sclerosi laterali amiotrofica (SLA). Forniamo un protocollo per la consegna delle cellule cervicali per corno ventrale del midollo spinale in modelli di roditori della SLA e SCI.

Intraspinale trapianto di cellule cervicali targeting per corno ventrale nella Sclerosi Laterale Amiotrofica e le lesioni traumatiche del midollo spinale

Il compromesso respiratorio dovuto alla perdita di motoneuroni frenici è una conseguenza debilitante di una vasta percentuale di lesioni midollari (SCI) traumatiche umane...

L'obiettivo generale di questa procedura è indirizzare trapianti multisegmentali intraspinali di cellule precursori neurali al midollo spinale cervicale, sostanza grigia ventrale, sia di ratti che di topi. Ciò si ottiene innanzitutto preparando il tipo di cellule precursori neurali di interesse per il trapianto. Successivamente viene eseguita una laminectomia sul midollo spinale in ciascun punto in cui è previsto il trapianto cellulare.Successivamente, le cellule vengono iniettate correttamente nei rispettivi punti e a profondità adeguate, al fine di indirizzare con precisione il rilascio cellulare nell'area del corno ventrale del midollo spinale cervicale. L'ultimo passaggio consiste nel proseguire con la somministrazione di immunosoppressione all'animale fino all'eutanasia, per garantire la sopravvivenza delle cellule trapiantate nel midollo spinale. In definitiva, è possibile ottenere risultati per il monitoraggio della sopravvivenza, migrazione e differenziazione delle cellule precursori neurali trapiantate nel midollo spinale cervicale adulto in diversi punti temporali successivi al trapianto, mediante metodi istologici come l'immunohistochimica e l'analisi successiva al micro

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Il trapianto di cellule staminali neurali del mouse (NSC) nel midollo spinale di topi con demielinizzazione stabilito è dettagliata. La preparazione del NSC, la laminectomia della vertebra toracica 9 (T9), e il trapianto di NSC si delinea con l'assistenza pre-e post-operatoria dei topi.

Il trapianto chirurgico di cellule staminali neurali del mouse nel midollo spinale di topi infettati con virus dell&#39;epatite neurotropi mouse

Fonte: Zweckberger, K., et al. Uso sinergico di cellule precursori neurali e peptidi autoassemblanti nella lesione sperimentale del midollo spinale cervicale.  J. Vis. Exp. (2015).Questo protocollo dimostra un approccio iniettivo mirato per la riparazione delle lesioni del midollo spinale in un modello di ratto. Prevede la somministrazione di peptidi autoassemblanti (SAP) nel nucleo della lesione per creare un'impalcatura di supporto, seguita da iniezioni di cellule precursori neurali (NPC)...

Iniezione di peptidi autoassemblanti e cellule precursori neurali per la riparazione del midollo spinale in un modello di ratto

Matrici di fibrina che contengono fattori di crescita sono stati usati per mantenere le cellule staminali neurali innestate nei siti di completo recisione del midollo spinale. Cellule trapiantate completamente riempite la cavità della lesione e differenziate in diversi tipi di cellule neurali, tra cui i neuroni che si estendevano assoni nel midollo spinale ospite su lunghe distanze.

Promozione della sopravvivenza e la differenziazione delle cellule staminali neurali con fibrina e fattore di crescita Cocktails dopo gravi lesioni del midollo spinale

Il trattamento della lesione del midollo spinale cervicale sia con peptidi autoassemblanti (SAP) che con cellule precursori neurali (NPC), insieme a fattori di crescita, è un approccio promettente per promuovere la rigenerazione e il recupero. Viene stabilito un modello di ratto con clip per contusione/aneurisma da compressione di lesione spinale cervicale e un trattamento combinato che prevede l'iniezione di SAP e il trapianto di NPC.

Utilizzo sinergico delle cellule neurali e precursori peptidi autoassemblanti in Sperimentale Cervical Spinal Cord Injury

Lesioni del midollo spinale è una condizione traumatica che provoca grave morbilità e mortalità elevata. In questo lavoro descriviamo in dettaglio un modello contusione di lesioni del midollo spinale nei topi seguita da un trapianto di cellule staminali neurali.

Neural Stem Cell Transplantation in Sperimentale Contusivi Model of Spinal Cord Injury

Le gravi lesioni del midollo spinale spesso provocano difetti tissutali. Vengono descritte due possibilità per colmare con successo tali lacune per promuovere l'adattamento tissutale, le risposte rigenerative e il miglioramento funzionale nei ratti attraverso l'impianto di un sistema di microconnettori meccanici dopo una lesione acuta e cinque settimane dopo la completa transezione del midollo spinale.

Strategie sperimentali per colmare grandi lacune tessuto nel midollo leso spinale dopo acuta e cronica Lesione

Questo articolo descrive una tecnica per inserire un cavo condotto tra i ceppi del midollo spinale dopo il transection completo e riempimento con cellule di Schwann (SCs) e matrice di iniettabili della membrana basale al fine di colmare e promuovere la rigenerazione degli assoni attraverso il gap.

Trapianto di Schwann Cells PVDF-TrFE condotto a ponte ratto Transected del midollo spinale ceppi per promuovere la rigenerazione degli assoni attraverso il Gap

In questo articolo, forniamo un metodo riproducibile per generare e mantenere a lungo termine fette organotipiche del midollo spinale trapiantate con cellule staminali neurali come modello ex vivo per testare terapie di sostituzione cellulare.

Coltura a lungo termine di fette organotipiche del midollo spinale di topo come piattaforma per la convalida del trapianto di cellule nella lesione del midollo spinale

In questo studio, sono stati sviluppati e caratterizzati idrogel compositi nervo-mimetici che possono essere utilizzati per studiare e capitalizzare il comportamento pro-rigenerativo delle cellule staminali di derivazione adiposa per la riparazione delle lesioni del midollo spinale.

Sviluppo di terapie combinatorie per le lesioni del midollo spinale utilizzando la somministrazione di cellule staminali

Il presente protocollo descrive lo sviluppo di un modello murino riproducibile di glioma del midollo spinale mediante l'iniezione di cellule tumorali nello spazio intervertebrale, offrendo un approccio più efficace e meno invasivo per la ricerca e lo sviluppo terapeutico.

Trapianto chirurgico di cellule tumorali nel midollo spinale di topi

Impara il trapianto intraspinale di cellule precursori neurali nel midollo spinale cervicale per proteggere i motoneuron frenici nei modelli di SLA e lesioni spinali. Questo protocollo dettagliato guida la sopravvivenza cellulare.

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Intraspinale trapianto di cellule cervicali targeting per corno ventrale nella Sclerosi Laterale Amiotrofica e le lesioni traumatiche del midollo spinale

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