Un test per la citotossicità mediata da proteine extracellulari batteriche sui PMN
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:14 min. • July 8th, 2025
Prendi una coltura di Staphylococcus aureus, un batterio patogeno che secerne leucocidina - una tossina che forma i pori - comprendente componenti monomerici S e F.
Pellet le cellule e diluisci in serie il surnatante. Trasferire il surnatante contenente leucocidina in una micropiastra contenente leucociti polimorfonucleati, o PMN, e incubare.
La componente S si lega a specifici recettori transmembrana sui PMN, seguita da etero-oligomerizzazione con la componente F da inserire nella membrana cellulare, con conseguente formazione di pori.
Il poro provoca una diminuzione degli ioni potassio intracellulari, attivando il dominio della pirina della famiglia NLR contenente la proteina 3 o NLRP3.
NLRP3 si lega a una proteina simile a uno speck associata all'apoptosi contenente un dominio di reclutamento della caspasi, o ASC, che recluta la pro-caspasi-1, formando un inflammasoma.
L'auto-proteolisi converte la pro-caspasi-1 in caspasi-1 attiva, innescando la morte cellulare.
Raccogli le celle a intervalli definiti. Aggiungere ioduro di propidio o PI, che entra nelle cellule morte attraverso le membrane danneggiate per legare il DNA, emettendo fluorescenza.
Utilizzando la citometria a flusso
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici