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$$\longrightharp{xx}$$,
Prendi una soluzione paramagnetica di gadolinio che risponde ai campi magnetici esterni.
Introdurre campioni di sangue Rhesus o positivi al fattore Rh marcati in fluorescenza e negativi al fattore Rh non marcati.
Aggiungere perle di polimero a bassa densità rivestite con anticorpi anti-RhD e perle ad alta densità non rivestite.
Gli
anticorpi anti-RhD si legano agli antigeni RhD sui globuli rossi Rh-positivi, formando complessi perlina-globuli rossi.
A questo punto, caricare il campione in una provetta capillare e sigillarlo. Posizionare il tubo tra i magneti nel dispositivo a levitazione magnetica.
Nel campo magnetico generato da magneti rivolti verso poli simili, la soluzione paramagnetica esercita forze magnetiche e di galleggiamento sui componenti del campione, facendoli levitare ad altezze proporzionali alla loro densità.
Le perle a bassa e alta densità levitano rispettivamente nella parte superiore e inferiore del capillare, stabilendo riferimenti di altezza di densità.
Le cellule del sangue, essendo diamagnetiche, vengono respinte da un forte campo magnetico vicino ai magneti e levitano in una posizione intermedia.
I complessi perlina-globuli rossi levitano tra le perle a bassa densità e i globuli rossi, con cellule fluorescenti in questo strato che confermano la presenza di globuli rossi Rh-positivi.
Per iniziare, utilizzare il dispositivo a lancetta con un clic per pungere il dito del donatore di sangue positivo al fattore Rhesus e raccogliere 10 microlitri di sangue in 1 millilitro di DPBS. Aggiungere 1 microlitro di colorante fluorescente in sospensione da 1 millilitro di cellule rhesus positive per colorare fluorescentemente la membrana plasmatica e incubare a 37 gradi Celsius per 15 minuti. Pellettare le celle centrifugando a 5.600 volte g per 15 secondi e lavare il pellet tre volte, utilizzando 1 millilitro di DPBS. Risospendere il pellet in 1 millilitro di HBSS con calcio e magnesio. Usa il pungidito con un clic per pungere il dito del donatore di sangue con fattore Rhesus negativo e raccogli due microlitri di sangue.
Per preparare la provetta sperimentale contenente solo perle, aggiungere 174 microlitri di HBSS con calcio e magnesio, 1 microlitro di perle di controllo IgG, 1 microlitro di perle pesanti, con una densità di 1,2 grammi per millilitro, e 24 microlitri di gadolinio da 500 millimolari.
Per preparare la provetta di controllo sperimentale contenente IgG, aggiungere 172 microlitri di HBSS con calcio e magnesio, 1 microlitro di perle di controllo IgG, 1 microlitro di perle pesanti, 1 microlitro di sangue Rhesus negativo, 1 microlitro di sospensione ematica colorata con fattore Rhesus positivo e 24 microlitri di gadolinio 500 millimolare.
Per preparare la provetta sperimentale del campione, aggiungere 172 microlitri di HBSS con calcio e magnesio, 1 microlitro di perle rivestite anti-RhD, 1 microlitro di perle pesanti, 1 microlitro di sangue rhesus negativo, 1 microlitro di sospensione ematica colorata con fattore rhesus positivo e 24 microlitri di gadolinio 500 millimolare. Installare il dispositivo di levitazione magnetica e caricare 50 microlitri di campione in un tubo capillare fino a riempire il tubo.
Sigillare le estremità del tubo capillare con un sigillante capillare, assicurandosi che non vi siano bolle. Posizionare il tubo capillare nel supporto capillare tra i magneti superiore e inferiore. Regola il tavolino e metti a fuoco per una visione ottimale. Attendere circa 5-20 minuti affinché le celle e le perle si stabilizzino nella loro posizione di equilibrio magnetico.