Una tecnica di colorazione del tetramero peptide-MHC-I per analizzare le cellule T di memoria CD8⁺ specifiche per SIV

Prendiamo le cellule mononucleate del sangue periferico dei primati non umani, o PBMC, contenenti cellule T di memoria CD8⁺ contro il virus dell'immunodeficienza delle scimmie o SIV.

Aggiungere un inibitore della proteina chinasi per prevenire l'internalizzazione del recettore delle cellule T, o TCR, dopo la successiva stimolazione.

Introdurre il complesso peptidico-maggiore di istocompatibilità di classe I, o tetrameri pMHC-I, complessi coniugati con fluorofori comprendenti quattro molecole MHC-I legate a peptidi specifici per SIV. Questi peptidi si legano ai TCR sulla superficie delle cellule T.

Aggiungere una miscela contenente anticorpi coniugati con fluorofori che si legano a CD8, CD28 e CCR7 - marcatori che delineano sottogruppi di cellule T di memoria - e anticorpi che marcano le cellule non CD8⁺.

Un colorante fluorescente di vitalità marca le cellule morte.

Correggi le celle. Permeabilizzarli per accedere a bersagli intracellulari.

Aggiungere anticorpi coniugati con fluorofori che legano CD3, un marcatore di cellule T e granzima intracellulare B, un marcatore di cellule T CD8⁺ attivato.

Utilizzando la citometria a flusso, escludere le cellule T non CD8⁺ e le cellule morte.