Un saggio del biofilm su piastra a pioli per lo screening di agenti antibatterici
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 6:41 min. • July 8th, 2025
Prelevare una piastra per microtitolazione con coperchio dotato di supporti cilindrici, o pioli, rivestiti di biofilm batterici.
Posizionare il coperchio del piolo rivestito di biofilm sui pozzetti della piastra per microtitolazione con tampone per eliminare i batteri poco attaccati o planctonici, concentrandosi sulle misurazioni attaccate al biofilm.
Trasferire il coperchio del piolo rivestito di biofilm risciacquato su una piastra di sfida con concentrazioni crescenti di agenti antibatterici di prova. Incubare senza agitare.
A seconda della concentrazione dell'agente e del potenziale antibatterico, interrompe l'attività metabolica batterica e l'integrità del biofilm.
Dopo l'incubazione, posizionare il coperchio del piolo sui pozzetti della piastra contenenti tampone per rimuovere i batteri planctonici.
Trasferirlo in pozzetti per piastre per microtitolazione con un terreno di recupero del biofilm contenente resazurina, un colorante permeabile alle cellule, debolmente fluorescente. Incubare.
Nei batteri metabolicamente attivi, gli enzimi deidrogenasi riducono la reazurina di colore blu in resorufina fluorescente di colore rosa.
La mancanza di conversione della resazurina indica l'
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