Utilizzo di sonde di tensione basate sul DNA per valutare le forze recettoriali applicate dalle cellule immunitarie
JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 5:58 min. • July 8th, 2025
Inizia con un vetrino coprioggetti funzionalizzato con nanoparticelle d'oro ancorate al polietilenglicole.
Aggiungere sonde di tensione a forcina di DNA contenenti una forcina di DNA ibridata con due oligonucleotidi in bracci opposti.
Il filamento del legante include un fluoroforo e una biotina, mentre il filamento di ancoraggio contiene un quencher e un gruppo tiolico. In questa configurazione, il quencher sopprime la fluorescenza.
Le sonde di DNA si legano alle nanoparticelle d'oro, ancorandosi al vetrino coprioggetti.
Introdurre la streptavidina, interagendo con le molecole di biotina dei filamenti del ligando.
Aggiungere ligandi biotinilati che si legano alle molecole di streptavidina pre-legate.
Sovrapporre il vetrino coprioggetti con cellule T CD8-positive; i loro recettori interagiscono con i ligandi immobilizzati, formando un sito di interazione recettore-ligando.
Questa interazione genera una forza che dispiega la struttura della forcina del DNA, separando il fluoroforo dal quencher e promuovendo l'emissione di fluorescenza.
Introdurre filamenti di bloccaggio non fluorescenti che interagiscono con i segmenti aperti delle sonde per preservare il segnale di fluorescenza.
Qua
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici