Visualizzazione basata su microscopia TIRF della formazione e della chiusura dei fagosomi

Prendi un piatto con fondo di vetro rivestito di polimero contenente globuli rossi opsonizzati IgG o RBC aderiti alla sua superficie.

Posizionare la capsula su un tavolino per microscopio a fluorescenza a riflessione totale interna, mantenendolo a temperatura fisiologica.

Aggiungere macrofagi contenenti peptidi citoplasmatici marcati in fluorescenza che si legano all'actina polimerizzata, facilitando la visualizzazione del citoscheletro.

Durante l'imaging, dirigere un raggio laser con un angolo superiore all'angolo critico, provocando la riflessione interna e la generazione di onde evanescenti nel punto di contatto.

Le onde evanescenti illuminano selettivamente i fluorofori all'interfaccia vetro-campione, consentendo la visualizzazione in tempo reale della fagocitosi.

I recettori Fc dei macrofagi si legano ai globuli rossi opsonizzati IgG, causando l'aggregazione dei recettori attorno all'area di contatto.

Il clustering innesca le vie di segnalazione intracellulare e l'attivazione della GTPasi, guidando la polimerizzazione dell'actina e il reclutamento della dinamina, formando pseudopodi.

Gli pseudopodi si estendono attorno ai globuli rossi, formando una coppa fagocitica.

Alla fine