JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:22 min. • July 8th, 2025
Iniziare con una provetta contenente vettori separati per i geni degli anticorpi a catena pesante e a catena leggera.
Aggiungere un reagente di trasfezione per formare complessi con i vettori.
Trasferire questa miscela alle cellule ospiti dei mammiferi e incubare per l'internalizzazione.
Aggiungere un agente antiaggregante per promuovere la distribuzione uniforme delle cellule trasfettate, migliorando il recupero e la crescita cellulare.
Aggiungere una soluzione antibatterica-antimicotica per prevenire la contaminazione.
All'interno della cellula ospite, i vettori si integrano nel genoma ospite.
Dopo la trascrizione genica, i singoli mRNA escono dal nucleo e subiscono la traduzione per formare catene anticorpali nascenti.
La corretta piegatura e modifica delle catene nascenti produce catene pesanti e leggere.
Queste catene si combinano per formare anticorpi completamente funzionali, che vengono poi rilasciati nel mezzo extracellulare.
Raccogliere il terreno e centrifugare. Filtrare il surnatante.
Far passare il filtrato attraverso una colonna di purificazione che permette il legame selettivo degli anticorpi.
Utilizzando un tampone di eluizione, eluire gli anticorpi purificati.
Colt
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