JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:03 min. • July 8th, 2025
Prendiamo le diluizioni seriali di un anticorpo che ha come bersaglio l'emoagglutinina del virus dell'influenza, o HA, una glicoproteina costituita da una testa globulare e un gambo.
Aggiungere le diluizioni su cellule di mammifero trasfettate che esprimono HA legato alla superficie. Gli anticorpi si legano alle regioni del gambo dell'HA, formando complessi immunitari.
Introdurre cellule T ingegnerizzate che esprimono recettori Fc e codificano un reporter di luciferasi sotto il controllo del fattore di trascrizione NFAT.
Durante l'incubazione, l'anticorpo legato all'HA si lega al recettore Fc, mentre la testa HA si lega all'acido sialico, innescando l'attivazione delle cellule T e aumentando la concentrazione citosolica di calcio.
Questa attivazione avvia una cascata di segnalazione che provoca la defosforilazione di NFAT, innescando la sua traslocazione nucleare.
NFAT si lega ai suoi elementi di risposta nel genoma, guidando l'espressione della luciferasi.
Aggiungere un substrato bioluminescente permeabile alle cellule. La luciferasi ossida il substrato, producendo un segnale.
La diminuzione della luminescenza con la diminuzione della concentrazione di anticorpi conferma l'attivaz
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici