JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 2:10 min. • July 8th, 2025
Preparare una miscela di trasfezione aggiungendo un polimero cationico appropriato e separare i vettori plasmidici per i geni degli anticorpi a catena pesante e a catena leggera.
Il polimero caricato positivamente si lega con i plasmidi caricati negativamente, formando complessi.
Aggiungere questa miscela di trasfezione a una piastra a più pozzetti contenente una coltura di cellule renali embrionali umane in un terreno privo di siero e incubare.
I complessi entrano nelle cellule attraverso l'endocitosi, causando gonfiore e rottura endosomiale, rilasciandoli nel citoplasma.
Il polimero cationico produce pori nella membrana nucleare, facilitando l'ingresso del vettore e consentendo la loro trascrizione, seguita dalla traduzione in proteine a catena pesante e leggera.
Queste proteine si spostano nel reticolo endoplasmatico, dove le proteine a catena pesante e leggera vengono dimerizzate e legate covalentemente da legami disolfuro, formando anticorpi.
Gli anticorpi viaggiano verso l'apparato di Golgi per ulteriori modifiche post-traduzionali e vengono impacchettati in vescicole per il rilascio extracellulare.
Raccogliere il terreno contenente gli anticorpi rilasciati. Aggiungere un ter
Visualizza la trascrizione completa e accedi a migliaia di video scientifici