JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 4:51 min. • July 8th, 2025
Prendete un topo immunizzato con una metallopeptidasi. Raccogliere la milza e ottenere una sospensione cellulare.
Filtrare la sospensione attraverso una rete e centrifugare, rimuovendo i detriti di tessuto.
Le cellule isolate includono cellule B specifiche per la metallopeptidasi, che producono anticorpi contro gli epitopi della metallopeptidasi.
Si aggiungano cellule di mieloma immortale prive dell'enzima HGPRT, impedendo il recupero delle basi nucleotidiche per la sintesi nucleotidica. Sopravvivono attraverso la sintesi nucleotidica de novo.
Centrifugare per ottenere un pellet e scartare il surnatante.
Aggiungere PEG e incubare, inducendo la fusione delle cellule del mieloma-B per formare ibridomi immortali HGPRT-positivi.
Aggiungere il terreno HAT composto da ipoxantina, aminopterina e timidina. Trasferimento in pozzetti contenenti uno strato di alimentazione peritoneale dei macrofagi, che favorisce la crescita degli ibridomi.
L'aminopterina blocca la sintesi nucleotidica de novo, causando la morte delle cellule di mieloma non fuse. Le cellule B non fuse muoiono a causa della loro breve durata di vita.
Gli ibridomi HGPRT-positivi recuperano i precursori nucleotidici ipoxantina e
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