JoVE Enciclopedia degli esperimenti
Immunologia
0 visualizzazioni • 3:38 min. • July 8th, 2025
Iniziare con una provetta contenente un agente di trasfezione cationico a base di lipidi e aggiungere plasmidi di espressione ricombinanti.
Il plasmide trasporta un gene che codifica per gli anticorpi ricombinanti che hanno come bersaglio la metallopeptidasi e la proteina fluorescente verde o GFP sotto un promotore, mentre il gene di resistenza agli antibiotici è sotto un altro promotore.
I lipidi caricati positivamente interagiscono con un plasmide caricato negativamente, formando un complesso.
Trasferire i complessi in una piastra a più pozzetti contenente cellule di mammifero, consentendo al plasmide di entrare nel citoplasma.
Il plasmide raggiunge il nucleo e viene trascritto in mRNA per proteine di resistenza agli antibiotici e mRNA bicistronici che codificano anticorpi ricombinanti e GFP.
Questi mRNA portano alla produzione di anticorpi ricombinanti, GFP e proteine di resistenza agli antibiotici.
Dopo la trasfezione, sostituire il terreno con un mezzo arricchito con siero.
Introdurre un antibiotico, eliminando selettivamente le cellule non trasfettate mentre le cellule trasfettate resistenti agli antibiotici sopravvivono.
Utilizzando la tecnica di smistamento cellulare attiva
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